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zhuzhuba1銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR提總RNA時(shí)，最后溶于DEPC水時(shí)有沉淀，不能完全溶解，是什么原因，能怎么補(bǔ)救
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| 大鼠足爪樣本，同樣取兩個(gè)樣本，同樣條件，最后，一個(gè)樣本在溶于DEPC水時(shí)有白色沉淀，稍一放置就分層，上層很透明，下層白色沉淀，之前在加異丙醇時(shí)沉淀就稍大，最后260/280的比值只有1.4，濃度300多，現(xiàn)在的關(guān)鍵問題是我沒時(shí)間再做一批動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，有沒有什么補(bǔ)救措施，再出現(xiàn)這種情況 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+2, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2012-10-20 08:03:51
看天: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 常來 2012-10-23 17:30:31
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| 沒做過動(dòng)物的，但是我做過植物的，不過道理應(yīng)當(dāng)是一樣的。你可以把這批樣品重新純化一下，也就是重新用氯仿等按步驟重新抽提。你這樣的應(yīng)該是RNA中有不溶性的物質(zhì)。另外在重新抽提的時(shí)候可以加大體系，也就是你的RNA如果溶解在100微升的水中，那么可以再加些DEPC水進(jìn)去，把體系變大。這樣在加入抽提劑純化的時(shí)候，RNA損失量要小些。我提取植物RNA的時(shí)候碰到過這種情況，不知道對你的實(shí)驗(yàn)是否合適，可以試試。希望能幫到你。 |
2樓2012-10-19 19:37:32
3樓2012-10-20 09:14:34
zhuzhuba1
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4樓2012-10-22 20:03:50
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5樓2012-10-23 10:44:07
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhuzhuba1: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-10-23 18:49:43
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zhuzhuba1: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-10-23 18:49:43
| 不會(huì)是因?yàn)榱看笠鸬陌伞?br /> 因?yàn)楹怂岜旧砗苋菀兹苡谒�，量再大，如果提的質(zhì)量比較好，加點(diǎn)水很容易就溶解了，動(dòng)物應(yīng)該比植物更好提取才是。我說的重新抽提，就是你把溶于水的MRNA當(dāng)做最初始的樣品溶液，重新按自己的步驟再來一遍就是了。我們用的方法不同，你按自己的方法，根據(jù)樣品溶液的體積再來就是了。而不是具體加多少氯仿等等，因法而異吧。 |
6樓2012-10-23 13:00:33
zhuzhuba1
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7樓2012-10-23 19:04:22
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8樓2012-10-24 00:24:07
9樓2012-10-24 13:30:25
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