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魍魎人生銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
如何完整的研究一個基因的功能 已有4人參與
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| 現(xiàn)在想研究下一個基因的功能，這個基因在人上面已經(jīng)有研究了，但是在我要做的動物上還沒有人做，但是有全基因組序列，那么請問我可以從哪些方面來研究這個基因的功能？分子？細胞？個體？具體可以進行哪些實驗？或者有沒有較全面的參考文獻？ |
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chriscda
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-12-11 21:42:53
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-12-11 21:42:53
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這個問題可大了。我覺得每個人能說一部分，但是說全了太難了，遺傳學的研究方法足以寫一本書。我想到這些： 應用半定量RT-PCR、定量PCR、原位雜交、免疫組化等方法了解基因的時空表達譜。知道基因什么時間在什么組織表達是了解其功能的基本。 在動物上 過表達/敲除或敲落 系統(tǒng)地分析表型，進一步分析機制�？紤]到基因表達的時間空間特異性，這種人工的上調(diào)或下調(diào)基因表達就有了許多種時間、空間的組合，可能會得到不同的結(jié)果，當然這些結(jié)果不一定矛盾，而可以是互補的。 如果基因的功能域不清楚，可以在了解主要表型的基礎上截短、缺失基因的一部分，以發(fā)現(xiàn)和了解各功能域的功能。 但以上方法的存在缺點。改變目的基因表達水平可能會導致一些后續(xù)變化，使生物過程偏離正常狀態(tài)，從中既可以進行分析了解其功能，也可能從變化了的生物體中得到異于實際情況的錯誤結(jié)論。 |
2樓2012-12-04 12:58:51
BXS523
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3樓2012-12-04 16:04:45
4樓2012-12-05 10:29:44
chriscda
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-12-11 21:43:07
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你的意思是研究編碼這個蛋白的基因的功能？ 那大致包含基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，翻譯后修飾等等。在找到表型之前，這些還都不足以成為你研究的興趣。我建議的第一步是了解這個基因的時間空間表達譜（轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平），從這里可以猜測基因的功能。 接下來，基因的發(fā)育生物學研究主要都從過表達、敲除或敲落或干擾或過表達顯性負效突變體，然后觀察表型開始（個體水平）。既然你的興趣是發(fā)育調(diào)控，要確認此蛋白對發(fā)育有調(diào)控作用。根據(jù)蛋白的類型，如轉(zhuǎn)錄因子，就通過研究它結(jié)合什么DNA，結(jié)合哪些蛋白逐步細化對其功能的認識；如果是受體，是哪一類受體，它在哪里定位，結(jié)合哪些配體，自身是否跨膜，是否會轉(zhuǎn)移定位，下游結(jié)合哪些蛋白；如果是酶，它結(jié)合什么底物，不一而足。 我覺得做發(fā)育生物學的研究重點是從表型出發(fā)，找到表型可能會很難，找到之后針對表型做分析，你自然會確定深入的方向。 [ Last edited by chriscda on 2012-12-5 at 11:49 ] |
5樓2012-12-05 11:45:49
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6樓2013-12-07 22:47:08
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