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球球愛(ài)跳鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
用ＣＴＡＢ法中含有的PVP提取葉子中的ＤＮＡ？
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我用ＣＴＡＢ法提取大豆葉子中的DNA時(shí)，在第一步水浴一個(gè)小時(shí)后離心后，綠色的絡(luò)合物在上面，為什么是在上面的? 我加的PVP是2% 和2%的巰基乙醇，那層綠色的東西在上面我怎么取上清�。空�(qǐng)大俠們指點(diǎn)一下吧 我用傳統(tǒng)的方法提取DNA怎么這么難呢 怎么都提取不出來(lái)，大豆葉就更提取不出來(lái)了嗚嗚  |
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2樓2012-10-22 16:38:44
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3樓2012-10-23 17:01:40
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這是前幾步，我用來(lái)提水稻的DNA沒(méi)有任何問(wèn)題 ① 取一離心管，加入7 ml 裂解緩沖液和70 μl巰基乙醇，稱重。 ② 剪取擬南芥的幼嫩葉片約1 g，剪碎置于研缽中，用液氮脆化后充分研磨至細(xì)粉末狀。快速移入離心管中，稱重，混勻。 ③ 加入120 μl RNase (100mg/mL)，充分混勻。再加入0.2 ml 15%的SDS溶液，充分混勻后于65°C下水浴30 min。 ④ 12,000 rpm，離心10 min。取上清。加入等體積苯酚/氯仿/異戊醇混合液（25:24:1），充分混勻。 ⑤ 12,000 rpm，離心10 min。取上清，加入等體積氯仿，充分混勻。 ⑥ 12,000 rpm，離心10 min。取上清，加入0.8倍體積的異丙醇，顛倒混勻。于-20°C靜置45 min，用于沉淀DNA。 |
4樓2012-10-23 18:14:12
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