 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1893 | 回復(fù): 6 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
尚軒舞雪銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
原核表達(dá)引物設(shè)計(jì)的問題
|
||
|
我要原核表達(dá)一個(gè)蛋白質(zhì)，表達(dá)載體是PET-32a（+），現(xiàn)有下面幾個(gè)問題要請(qǐng)教一下： 1. 設(shè)計(jì)引物的時(shí)候需不需要去掉終止子（TAA）和起始子（ATG）？ 2. 我用的酶切位點(diǎn)是EcoRI和XhoI，這兩個(gè)酶切位點(diǎn)前加幾個(gè)保護(hù)堿基合適并且不會(huì)造成譯碼突變? 3. 另外我不打算純化表達(dá)的蛋白，只是做個(gè)SDS-PAGE電泳和Western驗(yàn)證下抗體的特異性，所以我表達(dá)蛋白時(shí)是做個(gè)全長(zhǎng)ORF的，還是一個(gè)肽段序列比較好？ 4. 原核表達(dá)蛋白的大小應(yīng)該怎么確定？ 各位大俠幫我一下，我身邊的人都不做這方面的實(shí)驗(yàn)，所以做起來問題很多，望大家?guī)臀乙幌? |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【經(jīng)驗(yàn)-心得】 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有283人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 做原核表達(dá)引物設(shè)計(jì)的有關(guān)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 原核表達(dá)之引物設(shè)計(jì)求證
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 蛋白激酶原核表達(dá)
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 原核表達(dá)引物設(shè)計(jì)的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 含信號(hào)肽的序列能否在原核表達(dá)系統(tǒng)PET-32a中表達(dá)
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 真核生物基因在大腸中表達(dá) 問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 畢赤酵母擴(kuò)大培養(yǎng)需要提供大量氧氣嗎？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】原核表達(dá)羊基因，cDNA長(zhǎng)度約為3kb，基因?yàn)橐环N有活性的酶
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】引物設(shè)計(jì)的 序列選擇問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】（引物設(shè)計(jì)）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影響目的基因的表達(dá)？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【專題】引入酶切位點(diǎn)的引物設(shè)計(jì)問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
messi1910
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 117.5
- 帖子: 40
- 在線: 7小時(shí)
- 蟲號(hào): 2095304
- 注冊(cè): 2012-10-30
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-11-02 13:55:36
尚軒舞雪: 金幣+8, ★★★★★最佳答案, 謝謝，學(xué)習(xí)了 2012-11-03 09:11:54
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-11-02 13:55:36
尚軒舞雪: 金幣+8, ★★★★★最佳答案, 謝謝，學(xué)習(xí)了 2012-11-03 09:11:54
|
pet32a這個(gè)載體好像有189個(gè)氨基酸，約20KD，pET-32a空載體表達(dá)的蛋白序列如下：MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLAGSGSGHMHHHHHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSEFELRRQACGRTRAPPPPPLRSGC 保護(hù)位點(diǎn)堿基數(shù)目幾個(gè)都無(wú)所謂，酶切就掉了。 最好表達(dá)全長(zhǎng)，只是多肽的話，理論上，如果你的抗體不是針對(duì)這個(gè)表位產(chǎn)生的抗體，那WB就是隱形哦，所以表達(dá)蛋白可以稍微大些，抗原表位就多些，得到陽(yáng)性信號(hào)的可能性大些。 |
7樓2012-11-02 11:31:58
xj0311
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 2112.1
- 帖子: 119
- 在線: 28.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1790392
- 注冊(cè): 2012-05-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 病原微生物變異與耐藥
2樓2012-10-29 15:56:52
尚軒舞雪
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 524
- 散金: 17
- 帖子: 166
- 在線: 37.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 760505
- 注冊(cè): 2009-04-30
3樓2012-10-30 10:26:57
xj0311
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 2112.1
- 帖子: 119
- 在線: 28.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1790392
- 注冊(cè): 2012-05-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 病原微生物變異與耐藥
4樓2012-11-01 09:43:05
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 司空. 2026-03-18 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +4 | 1孫悟空 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 26研0 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +11 | zjl的號(hào) 2026-03-16 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達(dá)46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +3 | S.H1 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級(jí)已過 本科山東雙非 求調(diào)劑！ +3 | 不想理你 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|