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axiye新蟲 (小有名氣)
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[求助]
real time PCR NTC 陽性擴增
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| 最近在做real time PCR實驗，突然有一次發(fā)現(xiàn)用模板10倍稀釋所做的標準曲線完全不標準，后來發(fā)現(xiàn)無模板對照也有陽性擴增，拿回來跑膠發(fā)現(xiàn)是目的片段，切膠回收測序也沒有問題，有沒有兄弟姐妹遇到過這種問題啊，都是怎么解決的呢？做了快一個月了，仍找不到具體原因，希望高手能夠解答！ |
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zhwenxing
木蟲 (著名寫手)
尛森蟲
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【答案】應助回帖
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axiye: 金幣+10, ★有幫助 2013-02-25 13:42:19
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axiye: 金幣+10, ★有幫助 2013-02-25 13:42:19
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1、樓主的問題其實挺籠統(tǒng)的，N有條帶，還是目的片段，說明模板混入了哈，氣溶膠？用的槍吸入污染？都有可能 2、稀釋10倍跑的不準，注意稀釋液和稀釋倍數(shù)的準確性 3、跑一下內參，看看是技術操作問題，還是PCR體系問題。 4、除了問題，重復兩次后仍然有同樣的問題，就先停止試驗，好好去查查文獻。注意，Qpcr的移液器我們都是單獨使用的！包括加內參的、N的都是單獨用！一般是先配出N來！ |
2樓2012-10-30 15:29:49
caoxin1984
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3樓2012-10-30 20:13:08
blackrose8089
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4樓2012-10-30 20:16:55
axiye
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5樓2012-10-30 21:24:49
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6樓2012-10-31 20:01:53
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