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淘氣維尼89木蟲 (小有名氣)
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[求助]
RT-PCR求助
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最近在做RT-PCR，使用的材料是實(shí)驗(yàn)室自己誘導(dǎo)培養(yǎng)的植物愈傷組織，提取RNA之后，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以此為模板進(jìn)行PCR。擴(kuò)增過500bp左右的基因，以及1500bp左右的基因，都沒有擴(kuò)出來?xiàng)l帶。將cDNA稀釋10倍后，500bp的基因片段擴(kuò)出來了，但是空白對照也有條帶。并且?guī)Э撞桓蓛�，感覺有東西沒跑出來似的。請大家?guī)蛶兔Ψ治鲆幌聠栴}出在哪，別的老師說問題可能有兩個(gè)方面：一是RNA質(zhì)量不好。二是選擇的細(xì)胞不好，有退化，所以大片段就擴(kuò)不出來 這是1500bp的基因，沒有目的條帶 這是500bp的基因，有目的條帶，最右邊是空白對照 |
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淘氣維尼89
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4樓2012-10-30 20:08:14
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caoxin1984
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【答案】應(yīng)助回帖
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1500bp的沒有條帶，建議 1. 在NCBI驗(yàn)證一下引物是否正確，是否是你要P的目的基因 2. 選擇一個(gè)陽標(biāo)，即確定該基因表達(dá)的組織 500bp雖然P出來了，但是條帶很弱，建議 1. 加大每孔上樣量 2. 改變EB或GelRed等的濃度 空白條帶有顯示，一般是因?yàn)榧訕游廴緦?dǎo)致，建議每次加樣時(shí)更換槍頭，最好用帶濾芯的槍頭 祝好運(yùn)！ |
3樓2012-10-30 19:49:25
淘氣維尼89
木蟲 (小有名氣)
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5樓2012-10-30 20:10:02
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