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承諾的眷湖新蟲 (初入文壇)
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[求助]
CTAB法提取乳酸菌DNA后電泳圖有多條帶事怎么回事？
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本人用CTAB法提取乳酸菌DNA，marker右邊的5個泳道是加了溶菌酶處理的菌株，為何后面會有條帶？做16S是否有影響？ 具體步驟如下： （1）每個離心管加1500ul培養(yǎng)物 （2）將上述裝有培養(yǎng)物的離心管放入離心機離心5分鐘（8000轉(zhuǎn)/s） （3）棄上清，再加1500ul培養(yǎng)物，混勻，放入離心機離心5分鐘（8000轉(zhuǎn)/s） （4）棄上清，加1mLTE緩沖液與沉淀物充分混勻，離心5分鐘(達到洗滌細菌沉淀物的目的) （5）棄上清，取567ulTE緩沖液置各有細菌沉淀物的小管，蓋上蓋子后放到震蕩機上進行震蕩或用移液槍吸推將其混勻 （6）加30ul10％SDS （7）加3ul20mol/L蛋白酶K，輕輕顛倒混勻 （8）放入37℃烘箱1h （9）加入100ul5mol/L的NaCL溶液，蓋上蓋子輕輕混勻 （10）加入80ulCTAB NaCL溶液，蓋上蓋子輕輕混勻 （11）65℃水浴10分鐘 （12）加入800ul酚/氯仿/異戊醇，輕輕混勻（去除蛋白質(zhì)和其他大分子物質(zhì)） （13）12000轉(zhuǎn)/s離心5分鐘 （14）取上清液（上層為蛋白質(zhì)，下層為苯酚）放入對應(yīng)的新的離心管 （15）再次加入500ul/L酚/氯仿/異戊醇溶液 （16）再次離心5分鐘 注：若15步的離心界面層的蛋白質(zhì)很少且分層較明顯，可省略17、18兩步 （17）用移液槍取出500ul左右的上清液置對應(yīng)的新的離心管，加2倍體積的無水乙醇和1/10的3mol/L NaAC （18）離心，將DNA沉淀到小管底部 （19）倒去上清液，只留底部DNA沉淀，向各管加500ul70％乙醇（洗滌DNA） （20）12000轉(zhuǎn)/s離心5分鐘 （21）棄上清液，晾干，重溶于30ul的TE緩沖液 （22）加入1ulRNA酶，37℃消化1小時 （23）DNA樣品在-20℃保存?zhèn)溆?br /> marker（3000）右邊5個泳道在第6步前加入10微升10mg/mL的溶菌酶，希望各位大俠幫忙解釋下，或者提供該方法不足之處，謝謝！ |
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2012-10-30 19:12:18, 433.05 K
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