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I聽雨的蝸牛新蟲 (初入文壇)
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[求助]
體外轉(zhuǎn)錄
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大家好，我最近在做體外轉(zhuǎn)錄的時候遇到一個問題！我所需要轉(zhuǎn)錄的目的片段是插入到pcDNA3.0這個載體中的EcoRI這個酶切位點(diǎn)中，片段長度為2146bp, 我用BglII和XhoI這兩個酶分別進(jìn)行線性化，然后T7轉(zhuǎn)錄酶(fermentas)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，但是無法轉(zhuǎn)錄得到正確大小的片段，電泳圖顯示轉(zhuǎn)錄之后的RNA條帶的大小在marker500 bp的位置以下，無論是跑變性膠還是跑非變性膠都是這個結(jié)果！我嘗試增加T7聚合酶的量，以及延長轉(zhuǎn)錄時間，轉(zhuǎn)錄過夜，都沒有效果。但是我同時在做的另外一個片段（約500 bp），轉(zhuǎn)錄可以得到正確大小的條帶。 請有經(jīng)驗的同志們分析一下可能的原因！ 圖.png |
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fuweilin2013
鐵蟲 (初入文壇)
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2樓2013-10-27 21:31:53
machao8405
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3樓2013-11-04 17:06:19
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