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I聽(tīng)雨的蝸牛新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
體外轉(zhuǎn)錄
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大家好，我最近在做體外轉(zhuǎn)錄的時(shí)候遇到一個(gè)問(wèn)題！我所需要轉(zhuǎn)錄的目的片段是插入到pcDNA3.0這個(gè)載體中的EcoRI這個(gè)酶切位點(diǎn)中，片段長(zhǎng)度為2146bp, 我用BglII和XhoI這兩個(gè)酶分別進(jìn)行線性化，然后T7轉(zhuǎn)錄酶(fermentas)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，但是無(wú)法轉(zhuǎn)錄得到正確大小的片段，電泳圖顯示轉(zhuǎn)錄之后的RNA條帶的大小在marker500 bp的位置以下，無(wú)論是跑變性膠還是跑非變性膠都是這個(gè)結(jié)果！我嘗試增加T7聚合酶的量，以及延長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄時(shí)間，轉(zhuǎn)錄過(guò)夜，都沒(méi)有效果。但是我同時(shí)在做的另外一個(gè)片段（約500 bp），轉(zhuǎn)錄可以得到正確大小的條帶。 請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的同志們分析一下可能的原因！ 圖.png |
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fuweilin2013
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2013-10-27 21:31:53
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3樓2013-11-04 17:06:19
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