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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


[交流] 大家用過什么好的濃縮蛋白的方法?蛋白溶液有 30ml

蛋白溶液有 30ml ,分子量57KD    濃度達(dá)不到實驗要求,想濃縮一下,有沒有人用過變色硅膠包埋透析袋的方法

就是把透析袋包埋在變色硅膠珠子中,放在密封保鮮盒里,把保鮮盒放在4度,等硅膠有一半變色時候再取出來

或者大家有什么好的,便捷的濃縮方法,希望能交流一下

[ Last edited by 阿嬌阿嬌 on 2012-11-5 at 11:32 ]
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阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
不知道你蛋白分子量多大,如果合適的話可以選擇 超濾離心管
2樓2012-11-05 10:57:13
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


引用回帖:
2樓: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-11-05 10:57:13
不知道你蛋白分子量多大,如果合適的話可以選擇 超濾離心管

分子量 57 KD,貌似超濾的體積很小吧?我總共有30ml呢
3樓2012-11-05 11:31:55
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引用回帖:
3樓: Originally posted by 阿嬌阿嬌 at 2012-11-05 11:31:55
分子量 57 KD,貌似超濾的體積很小吧?我總共有30ml呢...

可以,millipor有3kd,10kd的,超濾這個蛋白足夠了,最小能濃縮到幾百微升,一個管可以濃縮15ml的樣品

[ Last edited by xiaoqi5992 on 2012-11-5 at 13:03 ]
4樓2012-11-05 13:01:50
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stone2239

鐵桿木蟲 (著名寫手)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
引用回帖:
3樓: Originally posted by 阿嬌阿嬌 at 2012-11-04 15:31:55
分子量 57 KD,貌似超濾的體積很小吧?我總共有30ml呢...

超濾離心管也有大管的,可以一次加15ml,你30ml兩次就可以濃縮完。
5樓2012-11-05 13:08:37
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


引用回帖:
5樓: Originally posted by stone2239 at 2012-11-05 13:08:37
超濾離心管也有大管的,可以一次加15ml,你30ml兩次就可以濃縮完。...

嗯,謝謝,我想先試試變色硅膠包埋的方法
8樓2012-11-05 13:41:43
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


引用回帖:
4樓: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-11-05 13:01:50
可以,millipor有3kd,10kd的,超濾這個蛋白足夠了,最小能濃縮到幾百微升,一個管可以濃縮15ml的樣品
...

嗯,謝謝,我想先試試變色硅膠包埋的方法
9樓2012-11-05 13:41:53
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遙控器68

金蟲 (小有名氣)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
引用回帖:
5樓: Originally posted by stone2239 at 2012-11-05 13:08:37
超濾離心管也有大管的,可以一次加15ml,你30ml兩次就可以濃縮完。...

最近也在用milipore的超濾管,一次4ml,您所說的一次15ml的好用不?可以考慮買了試試。
14樓2012-11-05 17:43:17
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zuoxin

銀蟲 (小有名氣)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
弱弱地說一下,曾經(jīng)用過聚乙二醇濃縮、、、、
15樓2012-11-05 18:29:07
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syhorchid

木蟲之王 (文學(xué)泰斗)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
試試?yán)鋬鰸饪s吧
16樓2012-11-05 18:53:24
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阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
超濾濃縮管效果還是可以..millipore等..
17樓2012-11-05 19:21:35
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dy_414

木蟲 (正式寫手)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
硅膠包埋弄不好可能對透析袋造成損失,用超濾吧milipore的六十多塊錢一個,30 ml兩個小時搞定

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]
18樓2012-11-05 23:11:39
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jinpeng_6118

木蟲 (正式寫手)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
用透析袋,鋪在聚乙二醇20000上濃縮
19樓2012-11-05 23:52:21
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huanancy2012

銀蟲 (小有名氣)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
如果對蛋白質(zhì)的活性不要求,可直接加熱,將多余的水分揮發(fā)掉,注意時刻加熱注意溫度不要太高,保證沸騰即可。如果要求活性,可以用抽真空的方式,將多余的水分除掉。還有就是,將蛋白溶液裝在透析袋中,用蔗糖包埋,速度也很很快,放在4度可;钚。
20樓2012-11-06 01:14:14
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阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
有條件用超濾就超濾吧,透析袋包埋操作起來比超濾復(fù)雜,而且不小心濃縮過度導(dǎo)致蛋白析出也是有可能的

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21樓2012-11-06 11:19:51
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


送鮮花一朵
引用回帖:
21樓: Originally posted by foryever at 2012-11-06 11:19:51
有條件用超濾就超濾吧,透析袋包埋操作起來比超濾復(fù)雜,而且不小心濃縮過度導(dǎo)致蛋白析出也是有可能的

我覺得透析袋包埋挺方便的啊,不過就是得一直觀察著硅膠顏色變化。
請問你用過這種方法嗎?不知道變色硅膠還有什么缺點?
22樓2012-11-06 12:12:02
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sunxu7213976

銅蟲 (初入文壇)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
變色硅膠包埋,這個我做過,當(dāng)時是用透析袋直接放在干燥劑里面。過1個小時就能發(fā)現(xiàn)體積變小了。很簡單

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23樓2012-11-06 14:41:27
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


送鮮花一朵
引用回帖:
23樓: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-06 14:41:27
變色硅膠包埋,這個我做過,當(dāng)時是用透析袋直接放在干燥劑里面。過1個小時就能發(fā)現(xiàn)體積變小了。很簡單

謝謝,我很疑惑,這種方法感覺是很簡單啊,可是怎么沒有得到推廣呢,大家用的不多啊,是不是有什么缺點呢?
24樓2012-11-06 15:33:50
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


引用回帖:
18樓: Originally posted by dy_414 at 2012-11-05 23:11:39
硅膠包埋弄不好可能對透析袋造成損失,用超濾吧milipore的六十多塊錢一個,30 ml兩個小時搞定

硅膠包埋弄不好可能對透析袋造成損失?
為什么呢?操作時候需要注意什么呢?
25樓2012-11-06 21:21:09
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


引用回帖:
23樓: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-06 14:41:27
變色硅膠包埋,這個我做過,當(dāng)時是用透析袋直接放在干燥劑里面。過1個小時就能發(fā)現(xiàn)體積變小了。很簡單

還想問一下,是先在PBS里面透析再包埋?還是先包埋再透析?
26樓2012-11-06 21:22:48
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sunxu7213976

銅蟲 (初入文壇)


當(dāng)時我是先透析,然后再包埋的
38樓2012-11-07 08:25:10
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sunxu7213976

銅蟲 (初入文壇)


引用回帖:
25樓: Originally posted by 阿嬌阿嬌 at 2012-11-06 21:21:09
硅膠包埋弄不好可能對透析袋造成損失?
為什么呢?操作時候需要注意什么呢?...

透析袋難道還要回收再利用嗎?,操作的時候只要注意不要把透析袋弄破了就行。注意觀察體積的變化。時間太長了濃縮得很高
39樓2012-11-07 08:28:53
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sunxu7213976

銅蟲 (初入文壇)


引用回帖:
26樓: Originally posted by 阿嬌阿嬌 at 2012-11-06 21:22:48
還想問一下,是先在PBS里面透析再包埋?還是先包埋再透析?...

我當(dāng)時是先透析,然后再包埋的
40樓2012-11-07 08:30:09
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


引用回帖:
39樓: Originally posted by sunxu7213976 at 2012-11-07 08:28:53
透析袋難道還要回收再利用嗎?,操作的時候只要注意不要把透析袋弄破了就行。注意觀察體積的變化。時間太長了濃縮得很高...

好的,謝謝

不過平常我們不濃縮,只在PBS里面透析的話,一個透析袋是用了3次的
41樓2012-11-07 14:22:31
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sunxu7213976

銅蟲 (初入文壇)


引用回帖:
41樓: Originally posted by 阿嬌阿嬌 at 2012-11-07 14:22:31
好的,謝謝

不過平常我們不濃縮,只在PBS里面透析的話,一個透析袋是用了3次的...

你們好節(jié)約啊,我都是一次性的
42樓2012-11-07 23:50:11
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yongbo_liang

新蟲 (小有名氣)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
濃縮方法有很多種
1.可以加入60%固體硫酸銨,直接將目的蛋白沉淀出來,然后再溶解;蚣尤胗袡C(jī)試劑沉淀均可。
2.PEG濃縮,將樣品裝入透析袋(3KD-10KD均可),然后包埋在PEG20000中,這種方法和你的變色硅膠相似,但問題是易受PEG污染,清洗干凈沒問題。
3.超濾濃縮:用3KD-10KD的超濾管,3500-3800rpm離心,即可。

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43樓2012-11-08 08:43:15
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阿嬌阿嬌

新蟲 (小有名氣)


送鮮花一朵
wizardfan: 請給適當(dāng)金幣獎勵,如果覺得有道理/有幫助的話。 2012-12-04 05:28:38
引用回帖:
43樓: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-08 08:43:15
濃縮方法有很多種
1.可以加入60%固體硫酸銨,直接將目的蛋白沉淀出來,然后再溶解;蚣尤胗袡C(jī)試劑沉淀均可。
2.PEG濃縮,將樣品裝入透析袋(3KD-10KD均可),然后包埋在PEG20000中,這種方法和你的變色硅膠相似, ...

非常感謝
44樓2012-11-08 09:26:38
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sxxuan

金蟲 (著名寫手)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
一般都是用超濾管
45樓2012-11-08 10:15:54
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lksyb

金蟲 (正式寫手)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
沒什么特別要求就用超濾管吧,簡單方便
47樓2012-12-03 22:08:16
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laoboshihou

金蟲 (正式寫手)



阿嬌阿嬌(金幣+1): 謝謝參與
可以,millipor有3kd,10kd的,超濾這個蛋白足夠了,最小能濃縮到幾百微升,一個管可以濃縮15ml的樣品
49樓2012-12-04 08:31:23
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簡單回復(fù)
2012-11-05 13:24   回復(fù)  
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xjy07917樓
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gkf12310樓
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58325060811樓
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祝福
ph0318102127樓
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wasxnbe33樓
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92987864036樓
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