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你們都測哪些指標(biāo)
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| 做有關(guān)植物的毒理實(shí)驗(yàn),大家一般都測哪些指標(biāo)呢?感覺自己測的指標(biāo)好少,我測抗氧化酶系(SOD/POD/CAT),MDA,還想測個(gè)超氧陰離子(O2-),大家覺著有沒有必要呢,是不是和前面哪個(gè)指標(biāo)重復(fù)?另外大家給我推薦幾個(gè)植物常測的方法比較成熟的指標(biāo)啊. |

專家顧問 (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +426 |
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上一個(gè)帖子可能講得太籠統(tǒng)。估計(jì)樓主是想研究某種物質(zhì)處理植物造成的一系列和ROS迸發(fā)相關(guān)的反應(yīng)。關(guān)于ROS工作,前一段時(shí)間我分享過一篇文章,你可以看看 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=4835328 關(guān)于測哪些指標(biāo),重點(diǎn)在于你要解決什么問題,指標(biāo)測的再多,說明不了任何問題,那就是浪費(fèi)時(shí)間精力,F(xiàn)在可以說幾乎所有外界刺激與損傷,都會引起ROS迸發(fā),抗氧化酶系活性變化,那么你單純測這些東西說實(shí)話沒意義,就算發(fā)文章也頂多是灌水的水平。舉個(gè)好文章的例子: Arabidopsis Nitric Oxide Synthase 1 Is Targeted to Mitochondria and Protects against Oxidative Damage and Dark-Induced Senescence Fang-Qing Guo and Nigel M. Crawford The Plant Cell December 2005 vol. 17 no. 12 3436-3450 這篇文章研究了線粒體NOS1對刺激的反應(yīng),以及NOS1帶來的NO與ROS迸發(fā)的關(guān)系,并沒有羅列一大堆各種各樣抗氧化指標(biāo),而是為了證明自己的觀點(diǎn),認(rèn)真的選取公認(rèn)可信的方法,做出漂亮可信的結(jié)果。這樣的工作解決問題,完整的講了一個(gè)故事,所以可以發(fā)到頂級雜志。咱們現(xiàn)在做的工作離plant cell可能很遙遠(yuǎn),但至少可以從想法和研究思路上向他們看齊。 我看過也解答過很多樓主的帖子,感覺你嘗嘗糾結(jié)于一些很細(xì)節(jié)的實(shí)驗(yàn)問題,這很可能是由于你所在實(shí)驗(yàn)組沒有支持你的條件,可以理解,深表同情,我也愿意盡可能幫你解決這些問題。但我感覺更重要的是你需要對自己的課題有更深入和全面的思考,在研究到底怎么做某些實(shí)驗(yàn)之前,更重要的是明白你的課題涉及哪些內(nèi)容,目前的最新研究進(jìn)展是什么,有哪些問題還沒有答案,自己如果要回答這些問題要怎么做等等。 |

專家顧問 (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +426 |

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感謝你一直以來對我的幫助,我也發(fā)現(xiàn)了只要我發(fā)帖子一般都是等你來回答 ,感覺你挺厲害的。我的實(shí)驗(yàn)做的也挺糾結(jié)的,各種不會各種不明白,大學(xué)知識全白學(xué)了現(xiàn)在一點(diǎn)用不上,等于從頭再來,老師給我定的課題又是我們實(shí)驗(yàn)室的先例,我是帶頭做的對我期望很大,師哥師姐不做這方面也沒法幫我,更是難上加難,目前書上有的常規(guī)指標(biāo)測的馬馬虎虎還算過關(guān),老板就老是糾結(jié)于ROS和彗星實(shí)驗(yàn)上,因?yàn)樗X著這是我們實(shí)驗(yàn)室的特色。彗星太難了,小麥,單子葉植物,想取細(xì)胞核來做彗星,我就看過兩篇文獻(xiàn),但一篇是培養(yǎng)的愈傷組織,還有一篇是直接養(yǎng)的小麥做的,而且作者是我以前的師哥,我現(xiàn)在天天聯(lián)系他問,最后他都怕了,把博士論文發(fā)給我說:我真不記得當(dāng)時(shí)怎么做的了你自己好好看看我的論文吧,而且一直勸我換指示生物,但是這是我們老師的國家自然基金的課題定的沒法換。ROS我也了解了一些,最常用的就是DCFH-DA,而且我們實(shí)驗(yàn)室做動物的也是用這個(gè)方法,儀器軟件啥的都準(zhǔn)備好了,那個(gè)什么激光共聚焦顯微鏡我都沒見過。。。,所以我研究了下他們動物的方法原理,感覺就是取線粒體再加探針最好能測熒光強(qiáng)度。我按這方法來試驗(yàn)了下,取植物線粒體再加探針測,試驗(yàn)階段很成功,我以為行了,但是正式實(shí)驗(yàn)就出問題了,有的處理組沒數(shù)據(jù)或很小,最近又試了好多次都不行,就是想不明白哪有問題,覺著是葉綠體影響了熒光強(qiáng)度,或者我沒取到線粒體,但是以前就是這么做的。。我又用根嘗試做,又有數(shù)據(jù)了,但是我前面指標(biāo)全是用葉測的,這個(gè)用根測老板說不行,F(xiàn)在我就一直糾結(jié)于這兩個(gè)指標(biāo),所以就想到了用其他指標(biāo)代替。你推薦給我的這篇文章我看過,我覺著測O2-和測SOD是重復(fù)的,測H2O2和測CAT時(shí)重復(fù)的,所以想測個(gè)總的ROS,這種想法對不對? 另外我剛看了一篇文獻(xiàn)測擬南芥ROS就是加探針測熒光強(qiáng)度,不知道你看過沒?The alternative oxidase lowers mitochondrial reactive oxygen production in plant cells. DENIS P. MAXWELL*, YONG WANG*, AND LEE MCINTOSH但是文獻(xiàn)太籠統(tǒng)了,我老是從文獻(xiàn)中學(xué)不到啥。 還有一點(diǎn)不明白的是,我看用DCFH-DA測ROS老提到什么六孔板什么的,感覺雖然都是用DCFH-DA法測的具體步驟也是不一樣的。我們都是直接提取線粒體,計(jì)算蛋白,根據(jù)蛋白量確定加的線粒體酶液量,最后再以每毫克蛋白的熒光強(qiáng)度表示結(jié)果來表明ROS的量。你要是感興趣的話我可以告訴你這個(gè)方法的具體,順便也幫我研究下這個(gè)方法,看我的思路是否可靠?我們師哥用這方法剛發(fā)了一篇文章,關(guān)于斑馬魚的,在Aquatic Toxicology上,題目是Effects of the ionic liquid [Omim]PF6 on antioxidant enzyme systems, ROS and DNA damage in zebrafish (Danio rerio)你有興趣可以看下。 |

專家顧問 (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +426 |
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動物的方法是否可以直接用在植物上,很難說。你的問題,很顯然是葉綠體影響,這也就是為什么根做出來而葉子不行。關(guān)于活性氧迸發(fā),測定各種活性氧和測定抗氧化酶是兩個(gè)概念,不能互相替代。不同活性氧存在一定的相互轉(zhuǎn)化,因?yàn)樗麄兲幱谝粋(gè)代謝系統(tǒng)內(nèi),同時(shí),不同活性氧也有不同的信號作用,譬如我以前做過的工作顯示某種次生代謝產(chǎn)物只受到H2O2調(diào)控,超氧和羥自由基并不影響。(當(dāng)然,是否都要測定取決于你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康,我以前搞次生代謝做活性氧,幾個(gè)指標(biāo)都測過,現(xiàn)在的組做活性氧,就考慮一個(gè)H2O2,照樣出好文章。) 關(guān)于實(shí)驗(yàn)方法,我還是建議你使用別的做植物的文獻(xiàn)上有報(bào)道的,且大家都用的方法。PNAS的方法講得還算詳細(xì)啊,有什么看不懂的? |

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