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襄陽(yáng)蓉兒新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于MTT的一些問(wèn)題，有點(diǎn)多。。。
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看論壇有很多相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，但是還是不太懂 1.DSMO藥物溶解：假如我用DMSO溶解藥物制成母液，那梯度稀釋的時(shí)候我用培養(yǎng)基的話，豈不是每孔DMSO的量也跟著被稀釋，那是不是每個(gè)藥物梯度我都要設(shè)置不同含量的DMSO調(diào)零和包括不同含量的DMSO細(xì)胞懸液的對(duì)照組濃度？ 2.有機(jī)溶劑稀釋：假如我用有機(jī)溶劑進(jìn)行稀釋，比如說(shuō)乙醇，是不是還要做一下百分之幾的乙醇溶解藥物對(duì)細(xì)胞的影響會(huì)小一些？那稀釋的時(shí)候是用培養(yǎng)基稀釋呢還是直接用乙醇稀釋呢？我用水提的藥物用有機(jī)溶劑稀釋是否可行？ 3.還有如果用培養(yǎng)基稀釋的話，到底是用含血清還是不含血清的？ 4.還有加藥是加2微升還是10微升還是20微升這個(gè)問(wèn)題，我理解的是不管加多少只要保證孔里藥的濃度是你要的就行了吧？不知道我表達(dá)的對(duì)不對(duì) [ Last edited by 襄陽(yáng)蓉兒 on 2012-11-7 at 10:29 ] |
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wy5346
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
看天: 金幣+5, 鼓勵(lì)回答 常來(lái)啊 2012-11-09 10:12:29
襄陽(yáng)蓉兒: 回帖置頂 2012-11-10 14:05:21
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襄陽(yáng)蓉兒: 回帖置頂 2012-11-10 14:05:21
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1.DSMO藥物溶解的問(wèn)題：用DMSO溶解藥物制成母液，梯度稀釋的時(shí)候不要用培養(yǎng)基，可以先用DMSO稀釋成不同的藥物梯度（如1000mM，500mM，100mM)，最后再用培養(yǎng)基1000倍稀釋，那么加入的藥物濃度相當(dāng)于是1000μM、500μM、100μM，這樣可以保證每孔中加入的DMSO量固定，那么你所設(shè)置的對(duì)照組就用培養(yǎng)基和DMSO 1000:1稀釋即可。 2.有機(jī)溶劑稀釋：應(yīng)該是要做一下百分之幾的乙醇溶解藥物對(duì)細(xì)胞的影響會(huì)小，一般1000:1不會(huì)有太大毒性，還得看你的染毒時(shí)間和你的藥物的溶解性。 3.用培養(yǎng)基稀釋的話，最好是不含血清的，因?yàn)槲覀兛炊拘宰詈檬亲尲?xì)胞停止生長(zhǎng)去看比較好。但是如果你看長(zhǎng)期毒性，不加血清的話細(xì)胞狀態(tài)會(huì)非常不好，里面長(zhǎng)有東西，我們實(shí)驗(yàn)室是這樣的，你可以試試，在你的染毒時(shí)間內(nèi)不加血清如果不出問(wèn)題，那最好是不要加血清。 4.原則上來(lái)講是只要保證孔里藥的濃度就可以，但是如果加的體積過(guò)大的話，如20μL，那么引入的DMSO或乙醇（藥物的溶劑）就越多，要知道這些東西也是有毒性的，會(huì)使你的數(shù)據(jù)不漂亮。 |
4樓2012-11-09 09:44:27
襄陽(yáng)蓉兒
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6樓2012-11-09 14:55:54
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