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liu58yeying金蟲 (小有名氣)
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[求助]
做標曲時怎樣加入內(nèi)標和對照品
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請問大家一個基礎(chǔ)的問題。我做空表血漿的標曲,先在EP管里加入了定量的內(nèi)標和對照品,將它們濃縮干,然后在加入血清,混勻,這樣可以嗎?因為我的樣品極性偏小,我擔心樣品一直粘在EP管壁上,沒有和蛋白充分結(jié)合,這就和in vivo的情況有差距了,不是嗎? 還有我一直擔心一個問題,就是如果我不濃縮干,而是在200 ul 血清中加入流動相溶解的對照品和內(nèi)標,流動相體積會不會對回收率有大的影響,10 ul的甲醇加進去會不會偏大了?謝謝大家?guī)兔Α? |
金蟲 (著名寫手)
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可以按照原來的方法,將樣品溶劑揮干后加入空白血清,然后再處理,一般來講,化合物都會與蛋白結(jié)合的,蛋白與化合物之間的作用力應(yīng)該是遠遠大于化合物與EP管之間的。 如果是不揮干,直接往血清中加入含溶劑的化合物標準品,那么將來在處理體內(nèi)的樣品時,同樣要先加入與之前溶解樣品相同體積的空白溶劑,然后再進行處理。 建立方法,最好考察一下絕對回收率,就是用處理好的樣品信號響應(yīng)除以相同濃度未處理的甲醇溶解的樣品的信號響應(yīng)。 |
新蟲 (小有名氣)
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這個問題我和同學(xué)討論了下:1.覺得標準品和內(nèi)標沒必要濃縮,因為增加了操作的步驟,反而有可能增加誤差,另外濃縮后的標準品和內(nèi)標可能更不易在血清中分散而影響結(jié)合。 2.即使你非濃縮不可,也一定要氮氣吹干,不然體積無法確定。在血清中加入標準品和內(nèi)標混合液時100ul血漿10ul甲醇都是可以接受的,回收率主要跟你的血清處理方法有關(guān)。液質(zhì)定量的話不要忘了考察基質(zhì)效應(yīng)。 |
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