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liu58yeying金蟲 (小有名氣)
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[求助]
做標(biāo)曲時怎樣加入內(nèi)標(biāo)和對照品
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請問大家一個基礎(chǔ)的問題。我做空表血漿的標(biāo)曲，先在EP管里加入了定量的內(nèi)標(biāo)和對照品，將它們濃縮干，然后在加入血清，混勻，這樣可以嗎？因為我的樣品極性偏小，我擔(dān)心樣品一直粘在EP管壁上，沒有和蛋白充分結(jié)合，這就和in vivo的情況有差距了，不是嗎？ 還有我一直擔(dān)心一個問題，就是如果我不濃縮干，而是在200 ul 血清中加入流動相溶解的對照品和內(nèi)標(biāo)，流動相體積會不會對回收率有大的影響，10 ul的甲醇加進(jìn)去會不會偏大了？謝謝大家?guī)兔Α? |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
liu58yeying: 金幣+20, ★★★很有幫助, 謝謝你的解答 2012-11-09 20:55:05
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liu58yeying: 金幣+20, ★★★很有幫助, 謝謝你的解答 2012-11-09 20:55:05
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可以按照原來的方法，將樣品溶劑揮干后加入空白血清，然后再處理，一般來講，化合物都會與蛋白結(jié)合的，蛋白與化合物之間的作用力應(yīng)該是遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于化合物與EP管之間的。 如果是不揮干，直接往血清中加入含溶劑的化合物標(biāo)準(zhǔn)品，那么將來在處理體內(nèi)的樣品時，同樣要先加入與之前溶解樣品相同體積的空白溶劑，然后再進(jìn)行處理。 建立方法，最好考察一下絕對回收率，就是用處理好的樣品信號響應(yīng)除以相同濃度未處理的甲醇溶解的樣品的信號響應(yīng)。 |
2樓2012-11-09 20:21:57
zlfok00
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
liu58yeying: 金幣+10, ★★★很有幫助, 恩，也很有道理，謝謝 2012-11-09 21:40:38
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liu58yeying: 金幣+10, ★★★很有幫助, 恩，也很有道理，謝謝 2012-11-09 21:40:38
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這個問題我和同學(xué)討論了下：1.覺得標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)沒必要濃縮，因為增加了操作的步驟，反而有可能增加誤差，另外濃縮后的標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)可能更不易在血清中分散而影響結(jié)合。 2.即使你非濃縮不可，也一定要氮氣吹干，不然體積無法確定。在血清中加入標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)混合液時100ul血漿10ul甲醇都是可以接受的，回收率主要跟你的血清處理方法有關(guān)。液質(zhì)定量的話不要忘了考察基質(zhì)效應(yīng)。 |
3樓2012-11-09 20:53:03
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