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鐵蟲 (初入文壇)

應助: 2 (幼兒園)
金幣: 31.1
帖子: 15
在線: 9.5小時
蟲號: 2014234
注冊: 2012-09-19
專業(yè): 食品科學基礎

[求助] 抗性淀粉測量的重現(xiàn)性

請教各位大俠，我最近做的是抗性淀粉的測定，用的是NDS來測，具體步驟
葡萄糖標準曲線的制作采用3,5-二硝基水楊酸法。分別精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL葡萄糖標準液(2.0 mg/mL)。對應的加入1、0.8、0. 6、0.4、0.2、0mL的蒸餾水，再分別加入2.0mL的DNS試劑，混勻后置于沸水浴中加熱2 min進行顯色，取出后立即冷卻至室溫，各加入蒸餾水9.0mL，搖勻后，靜止2min在540 nm波長處測定光吸收值。以葡萄糖含量(mg/mL)為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線。
蓮子抗性淀粉的檢測[ ]
粗提的蓮子抗性淀粉樣品，加入pH=6.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液，再加入過量α-淀粉酶（500 U/g），37℃下酶解16 h。用4 mol/L 的檸檬酸調節(jié)pH至4.0-4.5 加入過量葡萄糖淀粉酶（5000 U/L），60℃ 酶解1 h。然后將樣品在4000 r/min 下離心10 min，棄上清液，用蒸餾水洗滌沉淀，離心，重復2次。在沉淀中加入5 mL 2 mol/L KOH，劇烈振蕩30 min，使抗性淀粉充分溶解。用1 mol/L 的醋酸溶液調節(jié)pH至4.0-4.5，加入過量葡萄糖淀粉酶，60℃ 酶解1h。樣品在4000 r/min 下離心10 min，收集上清液至100 mL 容量瓶中，用蒸餾水洗滌沉淀，離心，重復2次，合并上清液，最后定容。用DNS法[ ]測定其還原糖含量。

式中：W1—還原糖的含量，g
W2—蓮子淀粉干基重量，g
可是我發(fā)現(xiàn)平行樣一個測的是抗性淀粉為百分15左右，而另一個平行樣幾乎就沒有，這是什么原因呢？還有抗性淀粉是在堿性條件下才會水解的，那之前酶解時間太長應該不會有太大影響吧。我想請教下大家我這種情況有可能是什么原因呢？還有就是有哪些因素會對我試驗的穩(wěn)定性造成影響？比如堿過量有關系嗎？

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1樓 2012-11-10 14:37:10

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