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竹林里的小蛇銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
香蕉蛋白sds--page 蛋白只跑到了膠的一半 已有6人參與
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| 我提取的香蕉蛋白,跑了兩次蛋白sds-page,兩次都是溴酚藍(lán)已經(jīng)到了膠底的時(shí)候,取出凝膠染色,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋白只跑到了凝膠的一半處,請(qǐng)問這個(gè)是什么問題啊。我用的電壓是80v的。分離膠濃度12%,濃縮膠5%。 |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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銅蟲 (小有名氣)
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SDS-PAGE啊 是聚丙烯酰胺的分子篩作用 溴酚藍(lán)的分子量只有670,C19H10Br4O5S 670是什么概念呢?一個(gè)碳原子的直徑是0.67nm,碳碳單鍵大概是0.7-1.5納米左右。這么算,溴酚藍(lán)即使是直鏈的狀態(tài)也就大概30nm。 而SDS-PAGE據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道最好的交聯(lián)尺寸(網(wǎng)狀孔)為20nm 這么說,溴酚藍(lán)在SDS-PAGE里面只受很小的阻力,所以跑的很快 當(dāng)所跑的蛋白非常大或者非常。ū热缧》肿与模,這時(shí)候溴酚藍(lán)的指示作用不明顯,因?yàn)閮烧唛g所受的力相差太遠(yuǎn)了。 當(dāng)SDS-PAGE濃度越高,溴酚藍(lán)跟marker的相差越大,有時(shí)候不能很好的標(biāo)定marker走到的地方了。 而且這時(shí)候的電壓不能說明什么,應(yīng)該看電流。電流的大小才是里面分子遷移的快慢吧。 個(gè)人見解,不知對(duì)否。還希望有高人證實(shí)或推翻我的猜想。 |
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