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竹林里的小蛇銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
香蕉蛋白sds--page 蛋白只跑到了膠的一半 已有6人參與
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| 我提取的香蕉蛋白，跑了兩次蛋白sds-page,兩次都是溴酚藍(lán)已經(jīng)到了膠底的時(shí)候，取出凝膠染色，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋白只跑到了凝膠的一半處，請(qǐng)問(wèn)這個(gè)是什么問(wèn)題啊。我用的電壓是80v的。分離膠濃度12%,濃縮膠5%。 |
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Phyrce
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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SDS-PAGE啊 是聚丙烯酰胺的分子篩作用 溴酚藍(lán)的分子量只有670，C19H10Br4O5S 670是什么概念呢？一個(gè)碳原子的直徑是0.67nm，碳碳單鍵大概是0.7-1.5納米左右。這么算，溴酚藍(lán)即使是直鏈的狀態(tài)也就大概30nm。 而SDS-PAGE據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道最好的交聯(lián)尺寸（網(wǎng)狀孔）為20nm 這么說(shuō)，溴酚藍(lán)在SDS-PAGE里面只受很小的阻力，所以跑的很快 當(dāng)所跑的蛋白非常大或者非常小（比如小分子肽），這時(shí)候溴酚藍(lán)的指示作用不明顯，因?yàn)閮烧唛g所受的力相差太遠(yuǎn)了。 當(dāng)SDS-PAGE濃度越高，溴酚藍(lán)跟marker的相差越大，有時(shí)候不能很好的標(biāo)定marker走到的地方了。 而且這時(shí)候的電壓不能說(shuō)明什么，應(yīng)該看電流。電流的大小才是里面分子遷移的快慢吧。 個(gè)人見(jiàn)解，不知對(duì)否。還希望有高人證實(shí)或推翻我的猜想。 |
7樓2012-11-13 16:07:54
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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2樓2012-11-11 02:14:09
berniehuang
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3樓2012-11-12 09:44:33
4樓2012-11-12 20:27:30
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