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758836596銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白刺激RAW264.7，Elisa檢測(cè)TNF-α的釋放
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| 我用蛋白刺激RAW264.7，24h之后Elisa檢測(cè)TNF-α的釋放，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陰性對(duì)照也就是只往細(xì)胞里加PBS而不加蛋白刺激，竟然可以檢測(cè)到大量的TNF-α的釋放，請(qǐng)做過(guò)這種實(shí)驗(yàn)的老師給指導(dǎo)一下吧，謝謝了！我培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基里面加入了血清，會(huì)不會(huì)是因?yàn)檫@個(gè)原因��？跟細(xì)胞的狀態(tài)有關(guān)系嗎？或者是和鋪板的細(xì)胞數(shù)太多有關(guān)系？ |
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1、血清里面有很多刺激因素，一般實(shí)驗(yàn)時(shí)都需要饑餓一段時(shí)間（即用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)；時(shí)間根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)情況定，可以查查相關(guān)文獻(xiàn)）； 2、細(xì)胞量要保證板與板之間沒(méi)有差別； 3、如果做到上述1、2后還是control不成立的話，需要做個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)(檢測(cè)所用溶劑中是否合格，尤其是水)了。 |
2樓2012-11-19 17:49:50
758836596
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我覺得問(wèn)題是這樣的： 1 你先檢測(cè)一下PBS和培養(yǎng)基，里面是不是含有內(nèi)毒素，這個(gè)可以用鱟試劑檢測(cè)，市面上賣的很多，不貴，大約100元/盒吧。因?yàn)镽AW264.7 對(duì)內(nèi)毒素（LPS）比較敏感，我們實(shí)驗(yàn)室原來(lái)做的時(shí)候都是用內(nèi)毒素-free的水； 2 鋪板的時(shí)候，細(xì)胞數(shù)量很重要的，太多了有死細(xì)胞也會(huì)引起培養(yǎng)體系的改變，導(dǎo)致內(nèi)源性的TNF增多； 3 可以鋪板的時(shí)候用正常量的血清，隨后貼壁好，換用無(wú)血清的培養(yǎng)基饑餓一段，我們叫同步化，使細(xì)胞都處于同一個(gè)細(xì)胞周期，這樣背景比較均一，這個(gè)在細(xì)胞周期試驗(yàn)中比較常用。 4 剩下的就是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的細(xì)心了。不可能對(duì)照組比處理組都高，還是哪些細(xì)節(jié)沒(méi)有注意到吧。 |
5樓2012-11-20 18:40:18
寧夏8083
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8樓2012-11-21 13:42:10
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10樓2012-11-21 19:46:25
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