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高照李木蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR技術(shù)求助
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我在做幾種昆蟲的DNA線粒體DNA COI片段，目的基因大小約600-700bp,用pcr擴(kuò)增COI片段，50μl的擴(kuò)增反應(yīng)體系是： Premix Ex Taq 25μl 引物1（LCO1490)（20μM）1μl 引物2 (HCO2198)（20μM）1μl 模板1μl（<50ng）1μl 滅菌蒸餾水 22μl PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性3min，94℃變性60s，50℃退火60s，72℃延伸60s，共35個(gè)循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸10min。 現(xiàn)在只P出3種，其他的種就是p不出來（都是1個(gè)亞科的），模板濃度梯度、退火溫度梯度PCR都做了，結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)就是沒有（空白對(duì)照也做了應(yīng)該不是引物的問題），不知道哪位高人能幫幫分析一下？ |
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zhaodahe
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2樓2012-11-19 20:55:38
高照李
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3樓2012-11-19 21:30:31
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4樓2012-11-19 22:17:13
高照李
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5樓2012-11-20 09:25:07
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