 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4568 | 回復(fù): 49 | |||
[交流]
【求助/交流】熱不對(duì)稱PCR的問題，回帖就送金幣�。《嘀x幫忙回答的，幫頂?shù)模。? 已有12人參與
|
|||
|
首先，熱不對(duì)稱PCR的好處是什么？它主要用來擴(kuò)已知序列的旁側(cè)基因，然后通過 一步步提高退火溫度，最后達(dá)到P出一條帶的目的。這樣理解對(duì)嗎？ 其次，我現(xiàn)在做啟動(dòng)子的染色體步移，加了接頭后。試劑盒也是推薦用熱不對(duì)稱PCR。但這時(shí)我知道我的接頭序列，又知道我的已知序列，完全可以用普通PCR擴(kuò)嘛。這樣想對(duì)嗎？ 還有，不太理解接頭引物AP和特異性引物GSP之間在片段長(zhǎng)度和退火上的差異。試劑盒上的：AP1:22個(gè)堿基 51度退火 AP2:19， 57度 。而建議我的GSP：25~28個(gè)堿基， 退火和GC和AP差不多。為什么堿基數(shù)差那么多？ 最后，2步法PCR（94度,64度）和3步法（94，退火，72度）有什么區(qū)別？好處是？ 大家一起來討論下這四個(gè)問題吧�。《嘀x了~~~謝謝�。。�！ 回帖就有金幣，每人可領(lǐng)5次�。� |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有77人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于一個(gè)高級(jí)酸和高級(jí)醇的酯化反應(yīng)，各種求助，有金幣伺候！
已經(jīng)有17人回復(fù)
- tail-PCR問題，求指導(dǎo)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 幫忙看一下這種分離程度能用來定量分析嗎
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 沒金幣求助，菌體在液體培養(yǎng)基中聚集成團(tuán)絮狀
已經(jīng)有21人回復(fù)
- PCR退火溫度態(tài)度會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增不出目的條帶么？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- pcr 帶好寬啊!苦惱，求助ing!
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 大家給我說說成都有機(jī)所的不對(duì)稱合成在國(guó)內(nèi)排名第幾吖
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求助：使用B-methyl CBS 不對(duì)稱還原酮為醇，CBS使用溶液的還是固體的好？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求助：約6kb質(zhì)粒做模板的pcr程序怎么設(shè)定啊
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 相同條件的pcr產(chǎn)物，跑出不同的條帶，是什么原因[/img][/img][/img]
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 怎么對(duì)回帖的人手動(dòng)發(fā)金幣？？？多謝
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 關(guān)于Molecular breeding的投稿問題(回帖就送金幣)
已經(jīng)有33人回復(fù)
- 回帖就送金幣。求高人指教。報(bào)到證與戶口遷移證過期問題。
已經(jīng)有43人回復(fù)
★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
silicare(金幣+2):謝謝參與 2010-10-18 11:46:52
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
silicare(金幣+2):謝謝參與 2010-10-18 11:46:52
|
樓上的太不厚道了，我說一下我的想法，呵呵 第一，你所說的熱不對(duì)稱PCR實(shí)際上是TOUCHDOWN PCR的逆過程，這是在模板量較少或這是引物與模板親和力較弱時(shí)使用的，目的是前面低溫退火經(jīng)過低特異性的擴(kuò)增獲得大量的模板，在提高退火溫度，進(jìn)行特異性高的擴(kuò)增，或得目的產(chǎn)物。 第二，普通PCR由于沒有中間的基因特異性引物，這樣就導(dǎo)致上下游引物之間的距離很長(zhǎng)，也就是PCR的產(chǎn)物片段太長(zhǎng)，從而使PCR得保真度降低，效率降低。所以在普通PCR的上下游引物之間加上GSP縮短的產(chǎn)物長(zhǎng)度。 第三，解釋不清楚，可以查一下Tm值除了GC含量外，還有其他的影響因素沒。 第四，兩步法PCR節(jié)約了時(shí)間，同時(shí)提高了退火溫度，增加了特異性。 以上僅為個(gè)人己見，有不妥之處，望各為蟲友指正，見諒。謝謝！ |
38樓2010-10-18 11:28:09
taigongzaici
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 325.7
- 散金: 12
- 紅花: 1
- 帖子: 157
- 在線: 19.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1115977
- 注冊(cè): 2010-10-07
- 專業(yè): 水產(chǎn)生物遺傳育種學(xué)
2樓2010-10-17 18:56:14
liyanchunk
禁言 (初入文壇)
★
adslye(金幣+1):謝謝參與
adslye(金幣+1):謝謝參與
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2010-10-17 19:08:53
liyanchunk
禁言 (初入文壇)
★
adslye(金幣+1):謝謝參與
adslye(金幣+1):謝謝參與
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2010-10-17 19:09:06
liyanchunk
禁言 (初入文壇)
★
adslye(金幣+1):謝謝參與
adslye(金幣+1):謝謝參與
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2010-10-17 19:09:19
liyanchunk
禁言 (初入文壇)
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
6樓2010-10-17 19:09:32
7樓2010-10-17 19:47:22
lhwei1987
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7542.9
- 散金: 144
- 紅花: 3
- 帖子: 393
- 在線: 288.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 844109
- 注冊(cè): 2009-09-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學(xué)
8樓2010-10-17 21:30:12
天龍n部
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 403.7
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 106
- 在線: 23.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1118927
- 注冊(cè): 2010-10-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
9樓2010-10-17 21:33:29
flytsing1003
金蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 609.1
- 散金: 743
- 紅花: 2
- 帖子: 1197
- 在線: 789.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1058172
- 注冊(cè): 2010-07-15
- 專業(yè): 代數(shù)學(xué)
10樓2010-10-17 21:35:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 adslye 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +21 | rare12345 2026-03-18 | 21/1050 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +8 | S.H1 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)，327分，材料與化工085600 +5 | Ncdx123456 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 曼殊2266 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +6 | z1z2z3879 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
申請(qǐng)回稿延期一個(gè)月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時(shí)間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +10 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +6 | lemonzzn 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817調(diào)劑 +3 | 沒有答案_ 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國(guó)級(jí)證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +8 | 大可digkids 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] [導(dǎo)師推薦]西南科技大學(xué)國(guó)防/材料導(dǎo)師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|