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海闊天空102木蟲 (正式寫手)
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[求助]
適配體 aptamer 與分析物相互作用相關(guān)
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適配體aptamer 如何能有效的與分析物結(jié)合，例如VEGF165與VEGF165 aptamer 有效結(jié)合需要注意哪些條件？比如溫度，ph，離子強(qiáng)度， 這與抗體與抗原的相互作用有什么主要區(qū)別？ 如何讓適配體高效結(jié)合分析物呢？ |
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海闊天空102: 金幣+5, 博學(xué)EPI+1 2012-11-20 23:18:47
海闊天空102: 金幣+5, 博學(xué)EPI+1 2012-11-20 23:18:47
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aptamer與靶標(biāo)的結(jié)合條件，主要取決于aptamer的篩選條件。對(duì)于一些用得比較多的aptamer，有不少參考文獻(xiàn)。當(dāng)然，現(xiàn)在有的文獻(xiàn)比較水，要注意雜志的檔次和文章的作者。 抗原-抗體的結(jié)合有前帶后帶的說(shuō)法，aptamer似乎沒(méi)有。 aptamer與靶標(biāo)的結(jié)合，與aptamer是否被固定有關(guān)。固定化的aptamer，一定要注意手臂的設(shè)計(jì)。 |
2樓2012-11-20 10:44:27
海闊天空102
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3樓2012-11-20 16:47:17
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【答案】應(yīng)助回帖
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海闊天空102: 金幣+5 2012-11-20 23:18:55
海闊天空102: 金幣+5 2012-11-20 23:18:55
| 個(gè)人感覺(jué)固定化的aptamer的手臂是為了降低位阻。。。aptamer在使用前變性是為了aptamer呈現(xiàn)鏈狀而不是相互糾纏在一起。也可以說(shuō)是為了增加aptamer與target的識(shí)別機(jī)會(huì)。至于離子強(qiáng)度，溫度和pH值在一定程度上會(huì)影響aptamer的選擇性和靈敏度，這個(gè)要靠實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，或者參考權(quán)威文獻(xiàn)，個(gè)人覺(jué)得一般情況下和篩選這種aptamer的條件是類似的。 |
4樓2012-11-20 18:08:28
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5樓2012-11-21 19:38:24
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6樓2012-11-27 08:51:34
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7樓2012-11-30 10:17:53
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海闊天空102: 金幣+15, ★★★很有幫助 2012-12-03 23:06:24
海闊天空102: 金幣+15, ★★★很有幫助 2012-12-03 23:06:24
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適配體aptamer 與分析物有效結(jié)合的有效結(jié)合取決于它們之間本身的親和性（例如解離常數(shù)或結(jié)合常數(shù)）；以及所用的buffer 種類 pH 鹽離子濃度等外部條件。 親和性可以通過(guò)文獻(xiàn)所報(bào)道的獲得，像ATP與其DNA aptamer解離常數(shù)在微摩爾級(jí)，所以要想觀察到明顯的結(jié)合，ATP需要在毫摩爾級(jí)的濃度。VEGF與aptamer親和性在100納摩爾左右，VEGF的濃度可能要到微摩爾級(jí)了。此外，VEGF是蛋白質(zhì)，需要防止其變性。 實(shí)驗(yàn)緩沖條件可以參考其原始文獻(xiàn)，即樓上所提到的篩選條件。 如果aptamer是固定在表面上，可能還會(huì)在很大程度上減弱其與分析物的親和性。影響的減弱在于連接臂的設(shè)計(jì)、在表面固定的密度等。 |
8樓2012-12-02 20:15:15
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