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江戶川哀新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求各位幫我看看我用EDC連蛋白的步驟哪步有問(wèn)題
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我想用EDC和NHS把辣根過(guò)氧化氫酶（HRP）和魚精蛋白（pro）連一起，但是折騰一個(gè)月了還沒(méi)搞定，糾結(jié)死了，請(qǐng)各位大神幫我看看做的哪步有問(wèn)題，先謝啦！ 1.用將pbs調(diào)ph到6.3，后預(yù)試將10mlpbs用NaOH調(diào)到PH7.3知道NaOH的用量 2.在10ml 1mg/ml的HRP（ph6.3的pbs溶液）中加入EDC5mg，NHS6mg，避光混合15min。 3.加入巰基乙醇15ul終止反應(yīng) 4.按預(yù)試，用NaOH將ph調(diào)到7.3 5.加入pro 4mg，室溫反應(yīng)2h 6.加入甘氨酸26mg終止反應(yīng)。 我的基本是按Therme的說(shuō)明書上的步驟來(lái)的，除了活化的步驟沒(méi)用MES。第五步反應(yīng)時(shí)間加到12h，溫度調(diào)到4度的也試過(guò)，還是沒(méi)連上。各位幫我看看哪步有問(wèn)題，或有啥好的建議、方法，希望能不吝賜教。 |
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