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ispenny新蟲 (初入文壇)
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qPCR空白有熒光信號(hào)，無(wú)法去除
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最近做一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌的16S qPCR實(shí)驗(yàn)，用的SYBR Green I 熒光嵌合法，空白都有擴(kuò)增，一般空白Ct值在30左右，最好記錄是34，但一直達(dá)不到35以后，貌似還有引物二聚體情況，目的片段約200bp。已經(jīng)做過(guò)很多次，換過(guò)藥品和引物，盡量保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境無(wú)菌，還是無(wú)法避免，同樣條件做別的菌的就沒(méi)問(wèn)題。請(qǐng)高手指點(diǎn)如何改進(jìn)，不勝感激！圖1中紅色為標(biāo)準(zhǔn)品溶解曲線，藍(lán)色綠色為陰性對(duì)照溶解曲線，陰性對(duì)照Ct值分別為32.9和30.5；圖2為另一相同實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，陰性對(duì)照Ct值分別為29.7和29.0。 1.JPG 2.JPG |
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