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ispenny新蟲 (初入文壇)
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[求助]
qPCR空白有熒光信號，無法去除
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最近做一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌的16S qPCR實驗，用的SYBR Green I 熒光嵌合法，空白都有擴(kuò)增，一般空白Ct值在30左右，最好記錄是34，但一直達(dá)不到35以后，貌似還有引物二聚體情況，目的片段約200bp。已經(jīng)做過很多次，換過藥品和引物，盡量保持實驗環(huán)境無菌，還是無法避免，同樣條件做別的菌的就沒問題。請高手指點如何改進(jìn)，不勝感激！圖1中紅色為標(biāo)準(zhǔn)品溶解曲線，藍(lán)色綠色為陰性對照溶解曲線，陰性對照Ct值分別為32.9和30.5；圖2為另一相同實驗的結(jié)果，陰性對照Ct值分別為29.7和29.0。 1.JPG 2.JPG |
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ispenny
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4樓2012-11-27 18:57:10
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2樓2012-11-27 15:26:36
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3樓2012-11-27 16:07:20
ispenny
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5樓2012-11-27 18:57:52
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