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為你學(xué)習(xí)

銅蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 我最近跑了一塊page凝膠電泳那位高手幫忙分析下為什么條帶會(huì)出現(xiàn)這種問(wèn)題？

我最近跑了一塊page凝膠電泳那位高手幫忙分析下為什么條帶會(huì)出現(xiàn)這種問(wèn)題？
圓圈里的電泳道理為什么會(huì)是黑的條帶為什么有深有淺？

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[ Last edited by 為你學(xué)習(xí) on 2012-11-29 at 17:49 ]

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好好學(xué)習(xí)，努力工作

1樓 2012-11-29 17:43:15

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shucanwei

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【答案】應(yīng)助回帖

還有一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)是銀染的步驟�？赡茱@影時(shí)間太久。你用氫氧化鈉還是碳酸鈉顯影？

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5樓2012-11-30 08:28:26

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

請(qǐng)問(wèn)你的樣品是什么？怎么獲得的？加樣量多少？初步判斷懷疑是樣品的問(wèn)題。顏色深淺是濃度大小有關(guān)。

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2樓2012-11-29 18:05:49

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引用回帖:

2樓: Originally posted by shucanwei at 2012-11-29 18:05:49
請(qǐng)問(wèn)你的樣品是什么？怎么獲得的？加樣量多少？初步判斷懷疑是樣品的問(wèn)題。顏色深淺是濃度大小有關(guān)。

棉花DNA 擴(kuò)增玩以后上的樣上樣量3ul 體系是10ul的模板1ul buffer 1ul 上下游引物各0.5ul taq 0.5ul ddH2O6.5ul 退火溫度55° 電泳電壓 200v 電流400ma 跑出來(lái)就這樣會(huì)是是退火溫度的問(wèn)題嗎？主要是想問(wèn)為什么條帶會(huì)是那么黑，不清楚。謝謝！

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好好學(xué)習(xí)，努力工作

3樓2012-11-29 18:20:46

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【答案】應(yīng)助回帖

我也預(yù)到這種情況。也咨詢了相關(guān)公司，原因可能是產(chǎn)物的濃度過(guò)大。也有可能是擴(kuò)增體系中殘留的酶引起的。酶為蛋白。也可能是模板濃度太高。建議將產(chǎn)物純化后稀不同濃度電泳�；蚓褪墙档湍０宓臐舛龋瑢⒛０逑♂尩揭患{克再擴(kuò)增。另外，請(qǐng)問(wèn)您的產(chǎn)物預(yù)計(jì)是單一的帶嗎？有沒(méi)有瓊脂糖電泳過(guò)？

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4樓2012-11-30 08:25:20

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