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wumeikui

新蟲 (小有名氣)

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[求助] 免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)

請教：免疫比濁法和酶聯(lián)免疫吸附法的區(qū)別聯(lián)系？

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1樓 2012-12-01 20:26:05

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藍(lán)心蝶1988

新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)

【答案】應(yīng)助回帖

酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記抗原或酶標(biāo)記抗體為主要試劑，
通過復(fù)合物中的酶催化底物呈色而對被
測物進(jìn)行定性或定量的標(biāo)記免疫技術(shù)。
基本原理
是：將酶與試劑抗原或抗體用交聯(lián)劑結(jié)合起來，此種酶標(biāo)記抗原或抗體與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生特異反應(yīng)，
并牢固結(jié)合，在加入相應(yīng)的酶的底物時，底物被酶催化生成呈色產(chǎn)物，在免疫組化染色時可指示待測反應(yīng)物的存在和定位，在酶免疫測定中，則可根據(jù)呈色物的有無和呈色深淺作定性或定量觀察。由于此技術(shù)是建立在抗原抗體反應(yīng)和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上，故而該技術(shù)具有檢測靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)，而且，可與其他技術(shù)偶聯(lián)而衍生出適用范圍更廣的新方法。
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某重酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，且既保留其免疫活性又保留酶的活性。
③標(biāo)本中的抗原或抗體、標(biāo)記抗原或抗體能按一定的次序與固相載體表面的抗體或抗原反應(yīng)，并通過底物與酶的反應(yīng)來反映標(biāo)本中的抗原或抗體的量。
免疫比濁法是抗原抗體結(jié)合動態(tài)測定方法。其基本原理是：當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)抗體濃度固定時，形成的免疫復(fù)合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也隨之增加。通過測定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。
1.免疫透射比濁法抗原抗體結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物，在一定時間內(nèi)復(fù)合物聚合出現(xiàn)濁度。當(dāng)光線通過溶液時，可被免疫復(fù)合物吸收。免疫復(fù)合物量越多，光線吸收越多。光線被吸收的量在一定范圍內(nèi)與免疫復(fù)合物的量成正比。利用比濁計測定光密度值，復(fù)合物的含量與光密度值成正比，同樣當(dāng)抗體量一定時，光密度值也與抗原含量成正比。本法較單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和火箭電泳等一般免疫化學(xué)定量方法敏感、快速簡便，但要求免疫復(fù)合物的數(shù)量和分子量達(dá)到一定高度，否則就難以測出。
2.免疫散射比濁法一定波長的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體復(fù)合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，光線偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長和抗原抗體復(fù)合物顆粒大小和多少密切相關(guān)。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比，即待測抗原越多，形成的復(fù)合物也越多，散射光也越強(qiáng)。散射光的強(qiáng)度還與各種物理因素，如加入抗原或抗體的時間、光源的強(qiáng)弱和波長、測量角度等密切相關(guān)。散射比濁法又分為速率散射比濁法和終點(diǎn)散射比濁法。
3.免疫膠乳比濁法膠乳比濁法即是將待測物質(zhì)相對應(yīng)的抗體包被在直徑為15－60nm的膠乳顆粒上，使抗原抗體結(jié)合物的體積增大，光通過之后，透射光和散射光的強(qiáng)度變化更為顯著，從而提高試驗(yàn)的敏感性。

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2樓2013-08-30 09:56:00

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