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首次使用液質(zhì)聯(lián)用問題請教
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1、準(zhǔn)備使用液質(zhì)聯(lián)用測量釀酒酵母胞內(nèi)代謝物含量，現(xiàn)有的是C18柱子，請問，要測定氨基酸及一些小分子多肽還有有機酸，是否需要柱前衍生化，如果需要使用，那是用PITC，還是OPA或者其他的衍生劑？考慮價格毒性、定量準(zhǔn)確性。 2、液質(zhì)聯(lián)用流動相一般用甲醇，乙腈就行嗎？還需要在液相上實驗分離條件嗎？在另外的液相上，使用另外的C18，獲得的實驗流動相條件，可以用于液質(zhì)使用嗎？ 3、最后物質(zhì)的定量是由質(zhì)譜圖確定的嗎？是不是每一種物質(zhì)的絕對定量都需要加入標(biāo)準(zhǔn)品？ 4、可否簡要說明一下首次使用液質(zhì)聯(lián)用的步驟？比如先確定流動相組成，用各種標(biāo)品混合物全掃描一次，等等。要自己做的，有經(jīng)驗的那種。 問題很多，新手， 多謝。 祝實驗都順利啊 |
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2樓2012-12-03 15:00:16
3樓2012-12-05 21:54:58
lzjessie_wlf
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chenyawei: 金幣+10, ★★★很有幫助, 不好意思，新手不知道怎么獎勵金幣，謝謝你的耐心回復(fù) 2012-12-27 13:16:23
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1 不用，但有可能要挑選C18柱子 2 液質(zhì)連用常用溶劑是甲醇，乙腈，水，其他溶劑的使用請參考柱子說明。盡量在LC系統(tǒng)完成分離，可用MS作為檢測器(MS的作用相當(dāng)于UV),做LCMS尋找合適的LC 分離條件。如果流速合適，LC系統(tǒng)允許，使用相同的C18柱子，LC條件可以直接用，但是進(jìn)質(zhì)譜需要分流或者調(diào)諧質(zhì)譜達(dá)到最佳效果。 3 物質(zhì)定量是由total ion chromatography的峰（使用peak area ratio)確定，需要加入internal standard（至少一種) 4 液質(zhì)一般來說，a) 先直接單一樣品(標(biāo)樣)進(jìn)樣，做MS full scan 確定母離子，做MS/MS 確定母離子/子離子對。 b) 每個標(biāo)樣做LCMS （SIM 或full scan 模式), 確定可以盡量在column上就可以分離所有的感興趣的化合物。 c) 混合或單一標(biāo)樣進(jìn)樣做LCMS （MRM 模式，最終定量使用模式），調(diào)諧質(zhì)譜，找到適合所有標(biāo)樣的質(zhì)譜參數(shù)。 d) 混合樣加內(nèi)標(biāo)做 LCMS, 確定內(nèi)標(biāo)的濃度。 e) 單一標(biāo)樣或混合加內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣做LCMS (MRM 模式)，找各標(biāo)樣的線性濃度范圍。 f) 加一系列已知濃度的某一(或多個)標(biāo)樣（含內(nèi)標(biāo)）歷經(jīng)整個實驗過程做標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線。 g) 背景樣品（不加釀酒酵母胞內(nèi)代謝物），實際樣品 （加釀酒酵母胞內(nèi)代謝物），標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（加釀酒酵母胞內(nèi)代謝物）同步制備，檢測。 |
4樓2012-12-06 00:34:34
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