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tianhui725

銅蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 請(qǐng)問(wèn)有誰(shuí)用過(guò)millipore的超濾管？

我想測(cè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，用millipore的超濾管將我需要的蛋白濾出，但是為什么相同體積（5ml）的上清，同時(shí)離心，剩下的液體體積卻不同？有些剩下三百微升，有些五百微升。我該怎么控制將其條件設(shè)置成相同啊？求高人指點(diǎn)。

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1樓 2012-12-03 22:28:12

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tianhui725

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8樓: Originally posted by hallen6891 at 2012-12-04 15:10:12
你用的應(yīng)該是15ml的那種超濾管吧，如果是新管子的話，應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)這種問(wèn)題的，我之前做過(guò)，但是當(dāng)你用過(guò)幾次之后，由于它上面的濾膜會(huì)吸附一些雜質(zhì)，如果你清洗不徹底的話，就會(huì)改變其透過(guò)能力，導(dǎo)致你說(shuō)的這種情況 ...

我用的是15ml的，是新的，不同細(xì)胞系提取的上清，都是5ml，離心半小時(shí)后所剩下的體積不同�？赡芪冶硎鲇姓`，我要的東西在上面。我現(xiàn)在就把濾得慢得再離心一會(huì)兒，只能達(dá)到每種差不多一致。不知這樣對(duì)蛋白濃度有沒(méi)有很大的影響啊。

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10樓2012-12-05 08:57:21

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cicelyzh

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kx444555: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-12-04 12:22:29

濃縮的速度不會(huì)完全一樣，樣品中的蛋白濃度、雜質(zhì)顆粒、緩沖液組分都有一定影響。最終的體積很難精確控制，如果體積大的樣品，就稍微多離心一會(huì)。

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2樓2012-12-04 08:00:12

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hbgdzscc

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tianhui725: 金幣+1, ★有幫助 2012-12-04 10:36:27

管沒(méi)用過(guò)，膜用過(guò)，可能與清洗不好有關(guān)，清洗終點(diǎn)要有量化的判斷標(biāo)準(zhǔn)。不知道超濾時(shí)，你壓力、時(shí)間等因素如何掌控。

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3樓2012-12-04 08:44:39

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-04 08:00:12
濃縮的速度不會(huì)完全一樣，樣品中的蛋白濃度、雜質(zhì)顆粒、緩沖液組分都有一定影響。最終的體積很難精確控制，如果體積大的樣品，就稍微多離心一會(huì)。

濃縮前提取每種細(xì)胞的上清都是5ml，相同時(shí)間濃縮后所剩的毫升數(shù)不同，那么我以濃縮后的上清來(lái)做細(xì)胞因子的表達(dá)水平，進(jìn)行對(duì)比的話，是不是已經(jīng)不準(zhǔn)確了？

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4樓2012-12-04 10:33:46

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