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heyide木蟲 (小有名氣)
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[求助]
啟動(dòng)子（用來在E.coli細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒上啟動(dòng)子下游適量本底表達(dá)一個(gè)特定的標(biāo)記基因）
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尋找在E.coli細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒上來適量本底表達(dá)一個(gè)特定的標(biāo)記基因的啟動(dòng)子。 想在E.coli細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒上穩(wěn)定表達(dá)一個(gè)熒光蛋白基因，用來作為實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參，無奈找不到合適的啟動(dòng)子，Lac系列的需要誘導(dǎo)表達(dá)不符合我的實(shí)驗(yàn)要求，用Amp promoter之后發(fā)現(xiàn)下游基因的本底表達(dá)量很低。 有誰做過類似實(shí)驗(yàn)，能否給點(diǎn)可參考的promoter？ 謝謝！ |
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heyide
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2樓2012-12-07 13:07:22
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我查了很多原核表達(dá)質(zhì)粒都是需要誘導(dǎo)的，T7lac系列，tac系列，需要IPTG誘導(dǎo)；還有一些是需要噬菌體侵染誘導(dǎo)或是溫度shift誘導(dǎo)。我用一些質(zhì)粒上標(biāo)準(zhǔn)出的Amp氨芐抗生素基因的promoter做實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在這個(gè)啟動(dòng)子加個(gè)其他的抗生素抗性基因，它的表達(dá)量很低，在抗性平板上都無法生長。最近我打算換個(gè)T5啟動(dòng)子試試，這個(gè)噬菌體來源啟動(dòng)子，E.coli自身RNA聚合酶可識別這個(gè)啟動(dòng)子，起始轉(zhuǎn)錄 |
4樓2012-12-09 01:02:59
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