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[交流]
蛋白質(zhì)磷酸化試驗中的問題交流 已有1人參與
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使用western的方法，檢測目的蛋白刺激細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)的Akt蛋白是否磷酸化。--------背景交代完畢，慣例割一個----------- 問題交流： 1 蛋白刺激細(xì)胞檢測信號通路的蛋白磷酸化的實驗，常見的刺激時間是多久? 2 怎么確定跑膠時每空上樣的蛋白總量是一樣的，防止出現(xiàn)western出現(xiàn)的條帶的深淺是由于上樣量不勻？難道還要總蛋白定個量？小弟上次做的比較粗放，96孔板中接相同體積的細(xì)胞，裂解細(xì)胞后上同樣體積的蛋白跑SDS-PAGE。 3 western 一抗撫育3天是否太過了。磷酸化的抗體結(jié)合比較困難。 |
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2樓2012-12-13 00:31:34
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