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[交流]
蛋白質(zhì)磷酸化試驗(yàn)中的問(wèn)題交流 已有1人參與
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使用western的方法，檢測(cè)目的蛋白刺激細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)的Akt蛋白是否磷酸化。--------背景交代完畢，慣例割一個(gè)----------- 問(wèn)題交流： 1 蛋白刺激細(xì)胞檢測(cè)信號(hào)通路的蛋白磷酸化的實(shí)驗(yàn)，常見(jiàn)的刺激時(shí)間是多久? 2 怎么確定跑膠時(shí)每空上樣的蛋白總量是一樣的，防止出現(xiàn)western出現(xiàn)的條帶的深淺是由于上樣量不勻？難道還要總蛋白定個(gè)量？小弟上次做的比較粗放，96孔板中接相同體積的細(xì)胞，裂解細(xì)胞后上同樣體積的蛋白跑SDS-PAGE。 3 western 一抗撫育3天是否太過(guò)了。磷酸化的抗體結(jié)合比較困難。 |
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2樓2012-12-13 00:31:34
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