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porphybaby金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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如果從來(lái)沒(méi)做過(guò)RT-PCR，要上手而且把結(jié)果做得好大概要做多久�。�
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我只是做了Western blot，已經(jīng)做完了，做出效果了。 不過(guò)還想補(bǔ)一下RT-PCR，想有個(gè)互相印證。 可是我?guī)熃闼齻兛偸钦f(shuō)RT-PCR比WB難做得多，不太想讓我再折騰。 我想問(wèn)，如果像我這種完全沒(méi)經(jīng)驗(yàn)的，只懂養(yǎng)細(xì)胞和做WB的，要把RT-PCR做好，需要多長(zhǎng)時(shí)間��？ 我覺(jué)得藥物作用濃度和作用時(shí)間啊那些我都不用摸了，跟WB完全一致就行了。應(yīng)該會(huì)省了不少事兒吧？ 其實(shí)就是提mRNA 然后逆轉(zhuǎn)錄 PCR那樣。。 |
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cicelyzh
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9樓2012-12-17 09:22:34
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就是，我們學(xué)校另一個(gè)課題組他們有做過(guò)跟我所需要的完全一樣的蛋白的RT-PCR，而且已經(jīng)做得很成熟。引物就跟他們一樣的。 只是我們是化學(xué)和藥學(xué)的，而我?guī)熃闳ド锬沁呑鯮T，他們的過(guò)程就會(huì)繁瑣得多。尤其是，他們會(huì)有個(gè)用DNAase處理樣品，以及RNA純化柱處理。所以整個(gè)過(guò)程就多了很多步驟，折騰來(lái)折騰去的。 我不知道那種傳統(tǒng)的Trizol提取，然后異丙醇沉淀，再乙醇吹干，DEPC水溶解，定量，cDNA，PCR。這樣的，沒(méi)有RNA純化柱那些，會(huì)不會(huì)不好。 |
10樓2012-12-17 14:43:45
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