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[求助] 酵母基因組DNA中的RNA怎么去除不掉？

近日在做酵母基因組DNA的提取，提取的DNA用分光光度計(jì)檢測(cè)A260/A280=1.91，瓊脂糖凝膠檢測(cè)小于100bp處有很亮的條帶，懷疑是RNA，用終濃度100μg/ml的RNAase37℃處理2h,再跑膠仍有該條帶，請(qǐng)教這是什么原因啊？

20121218yeastDNA.jpg

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1樓 2012-12-20 10:13:22

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susizheng

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★
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melaniqiuqiu: 金幣+1, ★有幫助 2012-12-20 15:56:18

應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)這種情況，加RNAase半小時(shí)基本就能除干凈。你放冰箱過(guò)夜再電泳試試。
一般即使不加RNAase，過(guò)一兩天，RNA自己也會(huì)降解，因?yàn)镽NAase無(wú)處不在。

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2樓2012-12-20 14:30:09

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melaniqiuqiu

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引用回帖:

2樓: Originally posted by susizheng at 2012-12-20 14:30:09
應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)這種情況，加RNAase半小時(shí)基本就能除干凈。你放冰箱過(guò)夜再電泳試試。
一般即使不加RNAase，過(guò)一兩天，RNA自己也會(huì)降解，因?yàn)镽NAase無(wú)處不在。

感謝回復(fù)。再請(qǐng)教有沒(méi)有可能是RNAase失效，或者那個(gè)亮條帶不是RNA？

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3樓2012-12-20 15:05:29

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xiangyubaoer

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

樓上說(shuō)的RNAase無(wú)處不在，的確..不過(guò)按說(shuō)去除RNA是在提DNA中的一步

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4樓2012-12-20 15:23:49

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susizheng

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3樓: Originally posted by melaniqiuqiu at 2012-12-20 15:05:29
感謝回復(fù)。再請(qǐng)教有沒(méi)有可能是RNAase失效，或者那個(gè)亮條帶不是RNA？...

圖中的最下端亮帶應(yīng)該是RNA無(wú)誤，
RNAase失效也有這個(gè)可能。

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Thank-you，so-blue.

5樓2012-12-20 15:50:57

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melaniqiuqiu

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引用回帖:

5樓: Originally posted by susizheng at 2012-12-20 15:50:57
圖中的最下端亮帶應(yīng)該是RNA無(wú)誤，
RNAase失效也有這個(gè)可能。...

6樓2012-12-20 15:53:49

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你的電泳有沒(méi)加RNase的對(duì)照碼？RNase 很穩(wěn)定，一般不會(huì)失活。如果不行，超離心可簡(jiǎn)單分離。

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7樓2012-12-21 08:54:52

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7樓: Originally posted by mguo15 at 2012-12-21 08:54:52
你的電泳有沒(méi)加RNase的對(duì)照碼？RNase 很穩(wěn)定，一般不會(huì)失活。如果不行，超離心可簡(jiǎn)單分離。

加RNase和沒(méi)加的沒(méi)有什么區(qū)別~感覺(jué)RNase沒(méi)發(fā)揮作用~用的是基因組提取試劑盒里自帶的RNase,-20℃保存的，不知道為啥不起作用。

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8樓2012-12-21 13:11:06

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近日把DNA原液稀釋5倍后進(jìn)行RNAase處理，跑膠顯示RNA基本已被去除

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9樓2013-01-07 14:16:06

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引用回帖:

9樓: Originally posted by melaniqiuqiu at 2013-01-07 14:16:06
近日把DNA原液稀釋5倍后進(jìn)行RNAase處理，跑膠顯示RNA基本已被去除

遇到一樣的問(wèn)題哎我的OD值都快2.1了就是除不掉

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10樓2013-06-18 14:49:46

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