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argon8436木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
量子點(diǎn)標(biāo)記的DNA電泳成像問(wèn)題
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我們做了一個(gè)量子點(diǎn)標(biāo)記DNA的實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)在用瓊脂糖凝膠電泳測(cè)一下DNA和量子點(diǎn)的滯孔濃度。圖中上樣孔從上到下的樣品分別為倍比稀釋的量子點(diǎn)TE溶液和一定濃度的DNA TE溶液，上面的量子點(diǎn)濃，下面的稀。用90V跑了20分鐘。跑電泳時(shí)候觀測(cè)到孔1-4均向負(fù)極跑，孔5看不出來(lái)。跑完后，膠在陽(yáng)光下的圖片和在凝膠成像儀上的圖片如上圖。 陽(yáng)光下：孔1-4的溴酚藍(lán)顯示向正極跑，孔2-4的上樣孔中還留有少量溴酚藍(lán)，且貼在了負(fù)極一側(cè)。孔5顯示向負(fù)極跑。（跟電泳中觀察到的不太一樣） 凝膠成像：只有孔1的上樣孔中有一點(diǎn)熒光。且觀察到上樣孔到負(fù)極的膠上有類似溴酚藍(lán)的帶。 請(qǐng)問(wèn)：1、電泳中和電泳后的溴酚藍(lán)跑的現(xiàn)象不一樣，是為什么？ 2、凝膠成像下的類似溴酚藍(lán)的帶是什么？它和陽(yáng)光下的圖片顯示的溴酚藍(lán)的帶為什么方向不一樣？ 3、量子點(diǎn)在瓊脂糖凝膠電泳后還會(huì)不會(huì)在紫外下發(fā)光？電泳會(huì)對(duì)量子點(diǎn)發(fā)光產(chǎn)生什么樣的影響？ 4、量子點(diǎn)標(biāo)記DNA后，對(duì)DNA和EB的結(jié)合有沒(méi)有影響？ 5、除了孔1，別的孔都沒(méi)有熒光，那么DNA跑哪兒去了？還是不能和EB結(jié)合？那在此情況下如何顯色？ 1324.png 123456.png |
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alicelchf
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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argon8436: 金幣+100, ★★★很有幫助, 確實(shí)很有啟發(fā),太感謝了! 2012-12-24 09:10:35
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 鼓勵(lì)熱心積極應(yīng)助 2012-12-24 10:48:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 鼓勵(lì)熱心積極應(yīng)助 2012-12-24 10:48:25
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1、電泳中和電泳后的溴酚藍(lán)跑的現(xiàn)象不一樣，是為什么？ 是一樣的。不應(yīng)該不一樣。不過(guò)，要看你的量子點(diǎn)是否都是帶負(fù)電荷的？是否重復(fù)實(shí)驗(yàn)都是這樣的結(jié)果？ 2、凝膠成像下的類似溴酚藍(lán)的帶是什么？它和陽(yáng)光下的圖片顯示的溴酚藍(lán)的帶為什么方向不一樣？ 溴酚藍(lán)的作用不過(guò)是指示你的膠大概跑得什么程度。從未有不一樣的現(xiàn)象。 3、量子點(diǎn)在瓊脂糖凝膠電泳后還會(huì)不會(huì)在紫外下發(fā)光？電泳會(huì)對(duì)量子點(diǎn)發(fā)光產(chǎn)生什么樣的影響？ 量子點(diǎn)在紫外下是會(huì)發(fā)光的，電泳時(shí)去掉EB才會(huì)有熒光的。EB會(huì)淬滅熒光。 4、量子點(diǎn)標(biāo)記DNA后，對(duì)DNA和EB的結(jié)合有沒(méi)有影響？ 量子點(diǎn)指示作用，對(duì)于DNA沒(méi)有什么影響，而且agarose千萬(wàn)不要EB才會(huì)有量子點(diǎn)的光的。 5、除了孔1，別的孔都沒(méi)有熒光，那么DNA跑哪兒去了？還是不能和EB結(jié)合？那在此情況下如何顯色？ 如果有熒光來(lái)自的只可能是本身的熒光蛋白和量子點(diǎn)，可以在你的量子點(diǎn)拍照后染色DNA，可以前后位置判斷結(jié)合 |
2樓2012-12-23 16:07:28
zhlf1989513
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3樓2012-12-23 18:21:43
我來(lái)找兔子
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4樓2020-08-19 12:46:26
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