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無形居士2009金蟲 (正式寫手)
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[求助]
如何充分形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)
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| 想把DNA單鏈通過退火使發(fā)卡結(jié)構(gòu)形成，可是跑膠后發(fā)現(xiàn)有一部分二聚體的形成~~急求各位大俠們，如何使它形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)，同時(shí)避免二聚體的行程呢？退火溫度怎么控制？？有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)們分享一下吧~ |
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2樓2012-12-27 09:49:16
無形居士2009
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4樓2012-12-27 11:56:55
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5樓2012-12-27 12:27:09
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6樓2012-12-27 14:07:45
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【答案】應(yīng)助回帖
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沒有PCR儀比較麻煩，需要高溫讓DNA變性，形成二聚體的DNA解鏈成單鏈，慢慢退火降溫的復(fù)性過程中，就可以最大程度上形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，實(shí)在不行用干浴鍋或者水浴鍋代替，一個(gè)94度，一個(gè)65度，只是這樣沒有做過，不知道效果怎么樣，降溫過程不能降得太快，要在退火溫度那里停留下，盡量讓發(fā)夾結(jié)構(gòu)形成，否則還沒來得及形成發(fā)夾就過溫度，立馬復(fù)性，很多地方隨意配對(duì) ，發(fā)夾結(jié)構(gòu)就更少了 |
7樓2012-12-27 15:41:21
無形居士2009
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8樓2012-12-27 16:38:17
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