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qingsong35銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
QPCR自己優(yōu)化可行嗎 不買商業(yè)試劑盒
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用Taqman探針做QPCR 如果不用商業(yè)試劑盒 而是自己買的酶 buffer dNTP Mg離子來優(yōu)化的話 效果如何 或者說這樣可行嗎 如果可行 話這幾項(xiàng)內(nèi)容中哪項(xiàng)是需要重點(diǎn)優(yōu)化的呢 謝謝哦 |
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2樓2012-12-27 14:43:51
qingsong35
銅蟲 (小有名氣)
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3樓2012-12-27 15:08:39
dongrh1981
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【答案】應(yīng)助回帖
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Q-PCR可以自己優(yōu)化。 優(yōu)化的重點(diǎn)是引物探針，一般情況下商品化的酶搭配的buffer已屬于較優(yōu)的選擇，所以buffer一般只是優(yōu)化一下用量，主要是其中的Mg離子，dNTPs和一些輔助擴(kuò)增的添加劑基本只能起少許的增強(qiáng)熒光強(qiáng)度或者提高PCR擴(kuò)增效率等作用，一般不是優(yōu)化的重點(diǎn)。 因此，如果你只是為了得到PCR擴(kuò)增曲線，自己設(shè)計(jì)一兩套引物探針，然后稍微優(yōu)化下就行；如果為了得到很好的結(jié)果，比較快而簡便的方法是直接用試劑盒。合成探針比較貴，設(shè)計(jì)多了就不如試劑盒方便了。 發(fā)文章的話建議自己設(shè)計(jì)幾套，一般公司都不會告訴你試劑盒里面引物探針的序列的。 |
4樓2013-01-06 09:31:15
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