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qingsong35銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
QPCR自己優(yōu)化可行嗎 不買商業(yè)試劑盒
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用Taqman探針做QPCR 如果不用商業(yè)試劑盒 而是自己買的酶 buffer dNTP Mg離子來優(yōu)化的話 效果如何 或者說這樣可行嗎 如果可行 話這幾項內(nèi)容中哪項是需要重點優(yōu)化的呢 謝謝哦 |
金蟲 (正式寫手)
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Q-PCR可以自己優(yōu)化。 優(yōu)化的重點是引物探針,一般情況下商品化的酶搭配的buffer已屬于較優(yōu)的選擇,所以buffer一般只是優(yōu)化一下用量,主要是其中的Mg離子,dNTPs和一些輔助擴增的添加劑基本只能起少許的增強熒光強度或者提高PCR擴增效率等作用,一般不是優(yōu)化的重點。 因此,如果你只是為了得到PCR擴增曲線,自己設計一兩套引物探針,然后稍微優(yōu)化下就行;如果為了得到很好的結果,比較快而簡便的方法是直接用試劑盒。合成探針比較貴,設計多了就不如試劑盒方便了。 發(fā)文章的話建議自己設計幾套,一般公司都不會告訴你試劑盒里面引物探針的序列的。 |

銅蟲 (小有名氣)
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