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hwchen2000金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
RT-PCR高手請(qǐng)進(jìn)
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請(qǐng)高手們幫我看看RT-PCR的電泳圖，給點(diǎn)建議 圖2中箭頭所指是曾經(jīng)得到的產(chǎn)物，但是之后再也沒(méi)有重復(fù)到，圖1是PCR和第二輪PCR結(jié)果 圖片1.jpg 圖片2.jpg [ Last edited by hwchen2000 on 2013-1-2 at 11:05 ] |
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2樓2013-01-02 17:27:39
zhang881007
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3樓2013-01-04 16:59:11
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 樓主的RT-PCR沒(méi)有做出來(lái)，首先要確定產(chǎn)物的大小，和標(biāo)準(zhǔn)條帶對(duì)比看看是否擴(kuò)增出來(lái)了，從兩個(gè)圖看，根本沒(méi)有擴(kuò)增出來(lái)。如果已經(jīng)重復(fù)很多次了都是這樣的話，建議重新開(kāi)始：方法一、提取mRNA時(shí)先跑個(gè)瓊脂糖快速電泳看看是否出現(xiàn)2或3個(gè)條帶，出現(xiàn)的話說(shuō)明mRNA這一步?jīng)]有問(wèn)題；方法二、換成隨機(jī)引物做PCR擴(kuò)增，如果出現(xiàn)明顯條帶就說(shuō)明樓主的引物設(shè)計(jì)有問(wèn)題，如果不出現(xiàn)條帶說(shuō)明可能是mRNA降解了壓根就沒(méi)有成功合成過(guò)cDNA。 |
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hwchen20004樓2013-01-04 17:53:46
hwchen2000
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5樓2013-01-07 20:52:12
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