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轉(zhuǎn)化子太多假陽性，怎么辦呀？
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我用Nde1和Xho1雙酶切pET28a和目的基因，連接轉(zhuǎn)化后驗證了15個轉(zhuǎn)化子，都是空載體。1、還要不要繼續(xù)驗證呀？2、我兩種酶是同時加的，同步酶切，這樣有沒有什么問題？3、為何會出現(xiàn)那么多空載體呀，怎么辦？ 先謝謝各位大俠啦！ |
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ccharlien
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5樓2013-01-03 21:50:01
cicelyzh
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
cdmmore: 金幣+3, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2013-01-03 16:30:17
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2013-01-07 17:07:10
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如果空載體很多，說明酶切有問題才連不上的。我覺得最好不要再驗證了，從新酶切連接轉(zhuǎn)化。 首先你要確定兩個酶都是工作的。分別單切載體都能完全切開。 我也用NdeI做克隆，第一次也沒有出。以我個人的經(jīng)驗，所有這些普通的克隆應該是one shot就差不多的。NdeI活性很強，時間稍長就會切過，酶也不要加多。我覺得你可以先不加NdeI切XhoI, 覺得切開了再加NdeI切20-30分鐘就可以了。 |
2樓2013-01-03 14:37:35
3樓2013-01-03 16:32:57
egaoxy
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4樓2013-01-03 21:22:50
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