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WAX2010銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
我可能發(fā)現(xiàn)了一種新奇的生物發(fā)光現(xiàn)象 已有19人參與
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實驗過程中發(fā)現(xiàn)了一個新奇的發(fā)光現(xiàn)象，想研究一下卻不知從何入手，希望各位前輩為我指點迷津。 我是細胞生物學專業(yè)的一名學生，平日主要從事細菌展示技術的研究，所用的細菌是大腸桿菌MC1061，內部有一個可誘導表達GFP和CM抗性的表達載體。實驗過程中需要對細菌離心和清洗，我一般采用3000g，5min離心，離心后會把上清的LB倒到一個小廢液缸里，清洗用的PBS也會倒入這個廢液缸，偶爾少量的菌液也會倒入此廢液缸，由于實驗比較忙，廢液缸里的廢液并非天天處理，有時候我看到里面渾濁或者表面漂了一層微生物，我都會加入新吉爾滅或者75%的酒精滅菌。前段時間有一次，我加入酒精后搖了搖，發(fā)現(xiàn)本來微黃的液體變成了藍綠色，我感覺很新奇但也沒太在意，就把廢液處理掉了，并把廢液缸用清水涮了涮。接下來一次廢液中加了一點75%酒精后又出現(xiàn)了一樣的現(xiàn)象。一開始我想是不是里面污染了其他的細菌或真菌，便把廢液吸出來，3000g，5min離心，可見有白色的細菌離下來，但上清依然是藍色的，我把藍色的上清放到紫外燈下，可以看到有很亮的藍白色熒光，而離心下來的細菌，PBS重懸后卻看不到熒光，即使將我們誘導GFP表達的菌PBS重懸后在紫外燈下也是看不到熒光的。我想上清有蛋白？我又把上清10000g，5min離心，并沒有看到有任何東西離心下來。因此上清中是不是產生了一種新的發(fā)光物質。我對這個現(xiàn)象很感興趣，因此把廢液收集了起來。放置了一夜后藍綠色又變成了淺黃色，振蕩搖動液體，液體慢慢從淺黃色變成淺藍色又變成藍綠色（以上現(xiàn)象可能說明變成藍色液體與酒精無關），而且隨著放置時間的延長，里面長起來的菌越來越多，搖動液體使其由黃色變成藍綠色花的時間也越來越長，這是不是說明里面某種物質在有氧存在的情況下可以發(fā)出藍光？但是我離心收集的上清放在EP管中一直是淺藍色的呀，顏色的變化也不一定依賴氧的存在，還是二氧化碳的存在抑制了藍綠色的顯現(xiàn)。上網(wǎng)查到有發(fā)光細菌，我看到的現(xiàn)象與發(fā)光細菌不同，發(fā)光細菌是在黑暗中看到光，而我觀察到的是在可見光下有藍綠色，紫外激發(fā)下也可產生熒光。 我也試圖從這個廢液中挑出感興趣的菌，我先取出少量廢液，加入到含有CM的LB中，發(fā)現(xiàn)菌長的很慢，而且長起來后，怎么搖動也沒有看到變色的現(xiàn)象，放在紫外燈下也沒看到有很強的熒光。 我又取了一點廢液到無CM的LB中，菌長的還可以，就是也沒看到變色現(xiàn)象？ 下一步該怎么辦呢？？ 希望大家多多指點，謝謝 [ Last edited by WAX2010 on 2013-1-3 at 14:30 ] 謝謝大家的建議，由于老板反對進行嘗試研究，菌種已被處理了…… [ Last edited by WAX2010 on 2013-10-8 at 14:42 ] |
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WAX2010
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30樓2013-01-05 14:49:26
cicelyzh
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amisking: 金幣+3, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-03 20:01:42
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現(xiàn)象非常有意思。你確定發(fā)光的是菌本身嗎？從你的描述感覺是photoreceptor。很多生物都有的，只是含量有限。我感覺還是和你倒在里面的工程菌和其上清直接相關的。我不知道為什么你的菌在紫外下沒有熒光。我做的熒光基因載體宿主可以在紫外下檢測到的。有些熒光的顏色特殊，還能直接用肉眼看到。 因為你的發(fā)光物質已經(jīng)在上清里面了，我覺得你可以試試純化發(fā)光物質，對其結構進行鑒定，分析是什么東西，然后再分析大量產生它的原因。 |
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WAX20102樓2013-01-03 16:26:24
3樓2013-01-03 20:40:31
zhaodahe
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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| 我覺得你觀察到的現(xiàn)象非常有趣，很有可能是某種會分泌到培養(yǎng)液中的物質（可能是蛋白質，或者化學物質），而非微生物；3000g是可以離心下大部分細菌的，而10000g并不能離去蛋白質；既然能觀察到較強的光，說明這種物質含量較高，可嘗試對其進行分離、鑒定。我覺得有幾個細節(jié)需要你注意：1、你在可見光下觀察到的顏色變化和紫外激發(fā)下的熒光是否為一種東西（光還是顏色變化？是否是同一波長的發(fā)射光？），2、發(fā)光現(xiàn)象是否不依賴酒精和氧氣（乙醇和氧氣分別做電子供體和受體？）。還有一點兒，發(fā)光細菌的發(fā)光并不一定在黑暗中，卻依賴于一些還原性物質。 |
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4樓2013-01-03 21:29:10
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