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marcosun木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助cell based ELISA的方法和應用
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學化學的，突然要考生物。簡答cell based ELISA的方法和應用。。。 求大神 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】應助回帖
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marcosun: 回帖置頂 2013-01-06 10:10:42
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 熱心，專業(yè) 2013-01-06 11:29:05
marcosun: 金幣+5 2013-01-07 00:06:02
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marcosun: 金幣+5 2013-01-07 00:06:02
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cell ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是用細胞代替可溶性抗原包被于96 孔酶聯(lián)板（或細胞培養(yǎng)板）進行免疫學檢測的一種有效方法，該方法特別適用于抗原位于細胞膜上而相應抗原的特性又不十分清楚或抗原難于純化等情況。 1、原理： ELISA的原理是使第一抗體結合到某種固相載體表面，同時用酶標記第二抗體，在測定時，把受檢標本、固相載體抗體和酶標二抗按不同的步驟與起反應，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例，加入酶反應底物，底物被酶催化生色且與受檢標本量相關，以此定性定量。 Cell ELISA的原理是用細胞代替了固相載體和受檢可溶性抗原，基于ELISA原理測定細胞表面特定的分子。而今年以此衍生出多種模式的細胞-ELISA。 2、與普通ELISA區(qū)別： 普通ELISA CELL ELISA 包被物質 可溶性抗原（或抗體） 受檢的細胞懸液 常用標記酶 HRP、ALP β-gal 目的 檢測可溶性抗原、抗體 測定細胞表面表達的特定分子、評定細胞功能 3、基本步驟為：制備受檢細胞懸液-----將其置于96孔板小孔內------加第一抗體------溫育洗滌后-----加第二抗體-----溫育洗滌----加底物液------顯色------判斷結果。 4、要點：細胞包被和96孔板洗滌，抗體選擇，標記酶的選擇，抗體-酶結合復合物的制備 5、優(yōu)點 用以檢測粘附細胞表面抗原優(yōu)于流式細胞儀，可測定粘附細胞表達的任何表面分子，還可檢測非粘附細胞。快速、方便、敏感性很高、可大量測定細胞表面分子表達。 6、應用 主要用于測定細胞表面特定的分子。 ①疾病的診斷和鑒別診斷：如采用cell ELISA鑒別結核性腦膜炎（TBM）和經不完全治療后的化膿性腦膜炎（PTPM），利用的是TBM患者腦脊液中存在一種30000蛋白抗原，可以被B淋巴細胞可以對此蛋白產生應答，PTPM則無此類反應。 ②藥物療效的考核：用細胞ELISA研究pravastatin對內皮細胞活化的作用；用細胞ELISA和逆轉錄酶聯(lián)反應觀察ICAM-1的表達以探討藥物ISA的作用；ELISA測定糖皮質激素地塞米松作用后內皮細胞產生血管細胞粘附分子(VCAM-1)和ICAM-1的水平。 ③發(fā)病機制的研究：全細胞細菌-ELISA測定COPD患者的抗H.influenzae抗體，研究COPD加劇與對influenzae應答的關系。 ④方法學比較 希望對你有用！ |
3樓2013-01-06 09:36:43
zhang881007
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cell ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是用細胞代替可溶性抗原包被于96 孔酶聯(lián)板（或細胞培養(yǎng)板）進行免疫學檢測的一種有效方法，該方法特別適用于抗原位于細胞膜上而相應抗原的特性又不十分清楚或抗原難于純化等情況。 1、原理： ELISA的原理是使第一抗體結合到某種固相載體表面，同時用酶標記第二抗體，在測定時，把受檢標本、固相載體抗體和酶標二抗按不同的步驟與起反應，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例，加入酶反應底物，底物被酶催化生色且與受檢標本量相關，以此定性定量。 Cell ELISA的原理是用細胞代替了固相載體和受檢可溶性抗原，基于ELISA原理測定細胞表面特定的分子。而今年以此衍生出多種模式的細胞-ELISA。 2、與普通ELISA區(qū)別： 普通ELISA CELL ELISA 包被物質 可溶性抗原（或抗體） 受檢的細胞懸液 常用標記酶 HRP、ALP β-gal 目的 檢測可溶性抗原、抗體 測定細胞表面表達的特定分子、評定細胞功能 3、基本步驟為：制備受檢細胞懸液-----將其置于96孔板小孔內------加第一抗體------溫育洗滌后-----加第二抗體-----溫育洗滌----加底物液------顯色------判斷結果。 4、要點：細胞包被和96孔板洗滌，抗體選擇，標記酶的選擇，抗體-酶結合復合物的制備 5、優(yōu)點 用以檢測粘附細胞表面抗原優(yōu)于流式細胞儀，可測定粘附細胞表達的任何表面分子，還可檢測非粘附細胞�？焖�、方便、敏感性很高、可大量測定細胞表面分子表達。 6、應用 主要用于測定細胞表面特定的分子。 ①疾病的診斷和鑒別診斷：如采用cell ELISA鑒別結核性腦膜炎（TBM）和經不完全治療后的化膿性腦膜炎（PTPM），利用的是TBM患者腦脊液中存在一種30000蛋白抗原，可以被B淋巴細胞可以對此蛋白產生應答，PTPM則無此類反應。 ②藥物療效的考核：用細胞ELISA研究pravastatin對內皮細胞活化的作用；用細胞ELISA和逆轉錄酶聯(lián)反應觀察ICAM-1的表達以探討藥物ISA的作用；ELISA測定糖皮質激素地塞米松作用后內皮細胞產生血管細胞粘附分子(VCAM-1)和ICAM-1的水平。 ③發(fā)病機制的研究：全細胞細菌-ELISA測定COPD患者的抗H.influenzae抗體，研究COPD加劇與對influenzae應答的關系。 ④方法學比較 |
4樓2013-01-06 09:45:11
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