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marcosun木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助cell based ELISA的方法和應(yīng)用
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學(xué)化學(xué)的，突然要考生物。簡答cell based ELISA的方法和應(yīng)用。。。 求大神 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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sunxiang1221
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cell ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是用細(xì)胞代替可溶性抗原包被于96 孔酶聯(lián)板（或細(xì)胞培養(yǎng)板）進(jìn)行免疫學(xué)檢測的一種有效方法，該方法特別適用于抗原位于細(xì)胞膜上而相應(yīng)抗原的特性又不十分清楚或抗原難于純化等情況。 1、原理： ELISA的原理是使第一抗體結(jié)合到某種固相載體表面，同時用酶標(biāo)記第二抗體，在測定時，把受檢標(biāo)本、固相載體抗體和酶標(biāo)二抗按不同的步驟與起反應(yīng)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)底物，底物被酶催化生色且與受檢標(biāo)本量相關(guān)，以此定性定量。 Cell ELISA的原理是用細(xì)胞代替了固相載體和受檢可溶性抗原，基于ELISA原理測定細(xì)胞表面特定的分子。而今年以此衍生出多種模式的細(xì)胞-ELISA。 2、與普通ELISA區(qū)別： 普通ELISA CELL ELISA 包被物質(zhì) 可溶性抗原（或抗體） 受檢的細(xì)胞懸液 常用標(biāo)記酶 HRP、ALP β-gal 目的 檢測可溶性抗原、抗體 測定細(xì)胞表面表達(dá)的特定分子、評定細(xì)胞功能 3、基本步驟為：制備受檢細(xì)胞懸液-----將其置于96孔板小孔內(nèi)------加第一抗體------溫育洗滌后-----加第二抗體-----溫育洗滌----加底物液------顯色------判斷結(jié)果。 4、要點：細(xì)胞包被和96孔板洗滌，抗體選擇，標(biāo)記酶的選擇，抗體-酶結(jié)合復(fù)合物的制備 5、優(yōu)點 用以檢測粘附細(xì)胞表面抗原優(yōu)于流式細(xì)胞儀，可測定粘附細(xì)胞表達(dá)的任何表面分子，還可檢測非粘附細(xì)胞。快速、方便、敏感性很高、可大量測定細(xì)胞表面分子表達(dá)。 6、應(yīng)用 主要用于測定細(xì)胞表面特定的分子。 ①疾病的診斷和鑒別診斷：如采用cell ELISA鑒別結(jié)核性腦膜炎（TBM）和經(jīng)不完全治療后的化膿性腦膜炎（PTPM），利用的是TBM患者腦脊液中存在一種30000蛋白抗原，可以被B淋巴細(xì)胞可以對此蛋白產(chǎn)生應(yīng)答，PTPM則無此類反應(yīng)。 ②藥物療效的考核：用細(xì)胞ELISA研究pravastatin對內(nèi)皮細(xì)胞活化的作用；用細(xì)胞ELISA和逆轉(zhuǎn)錄酶聯(lián)反應(yīng)觀察ICAM-1的表達(dá)以探討藥物ISA的作用；ELISA測定糖皮質(zhì)激素地塞米松作用后內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生血管細(xì)胞粘附分子(VCAM-1)和ICAM-1的水平。 ③發(fā)病機(jī)制的研究：全細(xì)胞細(xì)菌-ELISA測定COPD患者的抗H.influenzae抗體，研究COPD加劇與對influenzae應(yīng)答的關(guān)系。 ④方法學(xué)比較 |
4樓2013-01-06 09:45:11
zhang881007
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【答案】應(yīng)助回帖
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marcosun: 回帖置頂 2013-01-06 10:10:42
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 熱心，專業(yè) 2013-01-06 11:29:05
marcosun: 金幣+5 2013-01-07 00:06:02
marcosun: 回帖置頂 2013-01-06 10:10:42
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 熱心，專業(yè) 2013-01-06 11:29:05
marcosun: 金幣+5 2013-01-07 00:06:02
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cell ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是用細(xì)胞代替可溶性抗原包被于96 孔酶聯(lián)板（或細(xì)胞培養(yǎng)板）進(jìn)行免疫學(xué)檢測的一種有效方法，該方法特別適用于抗原位于細(xì)胞膜上而相應(yīng)抗原的特性又不十分清楚或抗原難于純化等情況。 1、原理： ELISA的原理是使第一抗體結(jié)合到某種固相載體表面，同時用酶標(biāo)記第二抗體，在測定時，把受檢標(biāo)本、固相載體抗體和酶標(biāo)二抗按不同的步驟與起反應(yīng)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)底物，底物被酶催化生色且與受檢標(biāo)本量相關(guān)，以此定性定量。 Cell ELISA的原理是用細(xì)胞代替了固相載體和受檢可溶性抗原，基于ELISA原理測定細(xì)胞表面特定的分子。而今年以此衍生出多種模式的細(xì)胞-ELISA。 2、與普通ELISA區(qū)別： 普通ELISA CELL ELISA 包被物質(zhì) 可溶性抗原（或抗體） 受檢的細(xì)胞懸液 常用標(biāo)記酶 HRP、ALP β-gal 目的 檢測可溶性抗原、抗體 測定細(xì)胞表面表達(dá)的特定分子、評定細(xì)胞功能 3、基本步驟為：制備受檢細(xì)胞懸液-----將其置于96孔板小孔內(nèi)------加第一抗體------溫育洗滌后-----加第二抗體-----溫育洗滌----加底物液------顯色------判斷結(jié)果。 4、要點：細(xì)胞包被和96孔板洗滌，抗體選擇，標(biāo)記酶的選擇，抗體-酶結(jié)合復(fù)合物的制備 5、優(yōu)點 用以檢測粘附細(xì)胞表面抗原優(yōu)于流式細(xì)胞儀，可測定粘附細(xì)胞表達(dá)的任何表面分子，還可檢測非粘附細(xì)胞�？焖佟⒎奖�、敏感性很高、可大量測定細(xì)胞表面分子表達(dá)。 6、應(yīng)用 主要用于測定細(xì)胞表面特定的分子。 ①疾病的診斷和鑒別診斷：如采用cell ELISA鑒別結(jié)核性腦膜炎（TBM）和經(jīng)不完全治療后的化膿性腦膜炎（PTPM），利用的是TBM患者腦脊液中存在一種30000蛋白抗原，可以被B淋巴細(xì)胞可以對此蛋白產(chǎn)生應(yīng)答，PTPM則無此類反應(yīng)。 ②藥物療效的考核：用細(xì)胞ELISA研究pravastatin對內(nèi)皮細(xì)胞活化的作用；用細(xì)胞ELISA和逆轉(zhuǎn)錄酶聯(lián)反應(yīng)觀察ICAM-1的表達(dá)以探討藥物ISA的作用；ELISA測定糖皮質(zhì)激素地塞米松作用后內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生血管細(xì)胞粘附分子(VCAM-1)和ICAM-1的水平。 ③發(fā)病機(jī)制的研究：全細(xì)胞細(xì)菌-ELISA測定COPD患者的抗H.influenzae抗體，研究COPD加劇與對influenzae應(yīng)答的關(guān)系。 ④方法學(xué)比較 希望對你有用！ |
3樓2013-01-06 09:36:43
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