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小子木雨銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
紫外吸收 測(cè)蛋白含量的 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作問(wèn)題
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我用牛血清蛋白用0.9%的氯化鈉配成到1mg/ml濃度，然后按下表 牛血清蛋白溶液（ml) 蒸餾水（ml) 0 4 0.5 3.5 1 3 1.5 2.5 2 2 2.5 1.5 3 1 3.5 0.5 4 0 加入試管中，以第一個(gè)管為參比，測(cè)定280nm下的吸光值，為什么出現(xiàn)的值都是0.2% ，Abs是2.776、2.755、2.785呢?希望盡快得到您的解答，謝謝 |
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2樓2013-01-05 16:58:46
hqsinberg
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【答案】應(yīng)助回帖
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laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-01-05 20:10:51
小子木雨: 金幣+3, ★★★很有幫助, 我用的不是考馬斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀釋了一下，測(cè)出的結(jié)果還是在2.幾，很是郁悶?zāi)?2013-01-08 20:33:49
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小子木雨: 金幣+3, ★★★很有幫助, 我用的不是考馬斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀釋了一下，測(cè)出的結(jié)果還是在2.幾，很是郁悶?zāi)?2013-01-08 20:33:49
| 估計(jì)不錯(cuò)的話(huà)，你應(yīng)該是用的brandford法測(cè)定蛋白（也就是場(chǎng)所的考馬斯亮藍(lán)G250法）。我感覺(jué)你的初始牛血清蛋白濃度偏高，我們一般配0.1mg/ml,然后稀釋不同倍數(shù)（類(lèi)似你的操作，溶液體系一樣大）。我們的經(jīng)驗(yàn)是10-90ug/ml線(xiàn)性比較好，你的濃度太高了，超出了量程，自然就不是線(xiàn)性了。還有就是brandford法要求玻璃比色皿，濃度從低往高測(cè)定，測(cè)完后要清洗干凈（乙醇浸泡，蒸餾水沖洗，測(cè)定液潤(rùn)洗0），再測(cè)下一個(gè)。一般相關(guān)系數(shù)都能到0.985左右。 |
3樓2013-01-05 19:04:15
hqsinberg
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【答案】應(yīng)助回帖
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再就是考馬斯亮藍(lán)法不能用石英比色皿，玻璃的即可。具體事宜可以參見(jiàn)http://www.doc88.com/p-78740359566.html，里面的做法比較準(zhǔn)確 |
4樓2013-01-05 19:10:03
sherry0012
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考馬斯亮藍(lán)G-250存在著兩種不同的顏色形式，紅色和藍(lán)色�？捡R斯亮藍(lán)G-250在酸性游離狀態(tài)下呈棕紅色，最大光吸收在465nm，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，最大光吸收在595nm。 在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物在波長(zhǎng)為595nm處的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，通過(guò)測(cè)定595nm處光吸收的增加量可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量。 所以如果是這種方法，測(cè)定波長(zhǎng)應(yīng)該是595nm |
5樓2013-01-07 09:24:21
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6樓2013-01-08 20:36:47
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7樓2013-01-08 20:39:17
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