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小子木雨銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
紫外吸收 測蛋白含量的 標準曲線制作問題
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我用牛血清蛋白用0.9%的氯化鈉配成到1mg/ml濃度，然后按下表 牛血清蛋白溶液（ml) 蒸餾水（ml) 0 4 0.5 3.5 1 3 1.5 2.5 2 2 2.5 1.5 3 1 3.5 0.5 4 0 加入試管中，以第一個管為參比，測定280nm下的吸光值，為什么出現(xiàn)的值都是0.2% ，Abs是2.776、2.755、2.785呢?希望盡快得到您的解答，謝謝 |
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laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-01-05 20:10:51
小子木雨: 金幣+3, ★★★很有幫助, 我用的不是考馬斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀釋了一下，測出的結(jié)果還是在2.幾，很是郁悶?zāi)?2013-01-08 20:33:49
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laozuzunzhe: 金幣+5, good! 2013-01-05 20:10:51
小子木雨: 金幣+3, ★★★很有幫助, 我用的不是考馬斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀釋了一下，測出的結(jié)果還是在2.幾，很是郁悶?zāi)?2013-01-08 20:33:49
| 估計不錯的話，你應(yīng)該是用的brandford法測定蛋白（也就是場所的考馬斯亮藍G250法）。我感覺你的初始牛血清蛋白濃度偏高，我們一般配0.1mg/ml,然后稀釋不同倍數(shù)（類似你的操作，溶液體系一樣大）。我們的經(jīng)驗是10-90ug/ml線性比較好，你的濃度太高了，超出了量程，自然就不是線性了。還有就是brandford法要求玻璃比色皿，濃度從低往高測定，測完后要清洗干凈（乙醇浸泡，蒸餾水沖洗，測定液潤洗0），再測下一個。一般相關(guān)系數(shù)都能到0.985左右。 |
3樓2013-01-05 19:04:15
2樓2013-01-05 16:58:46
hqsinberg
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5樓2013-01-07 09:24:21
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