 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3221 | 回復(fù): 16 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
imyting至尊木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
小肽電泳低于5KD的小肽看不到條帶
|
||
| 本人正在做的小肽是2.5KD,使用的是中科瑞泰生物公司的超低蛋白maker，其中3.5和1.4KD 的條帶看不見。不知道是什么原因，求小肽電泳達人指教。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 電泳、bio-rad 電轉(zhuǎn)化儀及操作 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
conanzzz» 猜你喜歡
08工科275分求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
材料工程322分
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿北京科技大學(xué)085601材料工程英一數(shù)二初試總分335求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
274求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
【求調(diào)劑】新能源材料本科，一志愿211，初試321
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料考研調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
英一數(shù)一408，總分284，二戰(zhàn)真誠求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
085410 一志愿211 22408分數(shù)359求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
271求調(diào)劑
已經(jīng)有19人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于小肽的鑒定
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 雙向電泳水化上樣，溴酚藍會影響B(tài)CA法或者考馬斯亮藍法的蛋白質(zhì)定量嗎？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 小肽分子量驗證？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 蛋白質(zhì)marker選擇
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 如何濃縮干1.2-丙二醇？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- bio-rad公司的蛋白電泳槽
已經(jīng)有3人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物直接雙酶切后電泳看不到條帶
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 請問，切膠回收后電泳檢測，條帶特別模糊，幾乎看不到，還能繼續(xù)連接轉(zhuǎn)化嗎
已經(jīng)有10人回復(fù)
- WB上樣時樣品往上漂溢出孔外，電泳后考馬斯亮藍染色條帶特別淺幾乎看不到。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 10KD大小多肽的電泳及鑒定方法求助
已經(jīng)有8人回復(fù)
imyting
至尊木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 66 (初中生)
- 金幣: 10558.2
- 散金: 658
- 紅花: 5
- 帖子: 805
- 在線: 167.6小時
- 蟲號: 736362
- 注冊: 2009-03-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
★ ★ ★
imyting: 回帖置頂 2013-01-07 18:06:22
wizardfan: 金幣+3, 謝謝補充信息，以后記得開帖的時候提供盡可能多的信息，以更快的獲得幫助 2013-01-17 04:00:43
imyting: 回帖置頂 2013-01-07 18:06:22
wizardfan: 金幣+3, 謝謝補充信息，以后記得開帖的時候提供盡可能多的信息，以更快的獲得幫助 2013-01-17 04:00:43
|
我的電泳就是按照這個說明書做的，希望大家?guī)兔纯从惺裁纯梢愿倪M的地方: 超低分子量蛋白質(zhì)Marker II（1.4-26.6kD） Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II ●產(chǎn)品編號及規(guī)格： RTD6107 10T（100μl） ● 儲存條件： -20℃保存，開封后有效期12個月。 ● 產(chǎn)品簡介： 本產(chǎn)品包含2種多肽和4種低分子量蛋白質(zhì)組成，可以用來判斷 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。分子量范圍為1.4kD-26.6kD，分子量大小為1.4kD，3.5kD，6.5kD，14.2kD，16.9kD，26.6kD。 ● 使用說明： 1. 超低分子量多肽的蛋白電泳較常規(guī)的蛋白電泳更為復(fù)雜，請仔細參閱說明書后再進行操作。 2. 收到產(chǎn)品后，室溫徹底融化混勻后，離心快甩將溶液收集到管底，根據(jù)需要適量分裝，-20℃貯存，每次使用時取一管使用。 3. 本產(chǎn)品已經(jīng)含有了樣品緩沖液，使用前取一管Marker樣品室溫徹底融化后，95℃預(yù)熱5分鐘即可上樣電泳，用考馬斯亮藍G-250染色后可見6條蛋白帶。一般說來，0.75mm×5mm（厚度×寬度）的加樣孔上樣10μl，其他規(guī)格梳子請適當調(diào)整上樣量。 注：一次熱處理后，未用盡樣品-20℃保存；下次使用時只要室溫完全融化混勻后即可上樣，可以不用再加熱處理。 4. 制膠：先配制分離膠，聚合后再配制濃縮膠。電泳時，80-100v跑30-60分鐘左右，待指示前沿到達分離膠上沿時，把電壓調(diào)至150-200v，至藍色指示前沿至分離膠3/4位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要3-4個小時。注：如果電泳時間過短，染色時，指示前沿容易遮擋1.4kD和3.5kD條帶。 5. 如果關(guān)心較小的多肽（小于5KD），電泳之后可將膠置于固定液中固定30分鐘，再進行染色，能得到較好的蛋白條帶；如果不固定直接染色，小蛋白會不清楚。如果使用配方7進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液（目錄號：RTD6201），該產(chǎn)品具有染色快，無毒，靈敏性高等特點，在小肽的染色中有更大的優(yōu)勢，是常規(guī)染色液的理想替代品。 6. 當用配方7進行染色時，由于超低分子量多肽極易從凝膠中浸出，因此染色時間不要太長，染色一般要1個小時左右（最多不要超過1.5小時）。 （背面續(xù)：凝膠配方） ● 附：小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制 1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠） 丙稀酰胺 38.67 g 甲叉雙丙稀酰胺 1.33 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml，過濾后使用。 貯存：4℃ 2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠） 丙稀酰胺 38 g 甲叉雙丙稀酰胺 2 g 用ddH2O溶解后定容至100 ml，過濾后使用。 貯存：4℃ 3. 凝膠緩沖液（配制凝膠用） [3M Tris; 0.3% SDS; pH8.45] Tris堿 182g ddH2O 300ml 1.5 g SDS或15ml 10％ SDS 用HCl調(diào)pH值至8.45 用ddH2O定容至500ml 貯存：4℃ 4. 10×陽極緩沖液（下槽緩沖液） [1M Tris pH8.9] Tris堿 121.1g ddH2O 400ml 用HCl調(diào)pH值至8.9 用ddH2O定容至500ml 貯存：4℃ 注：使用前稀釋成1×陽極緩沖液使用。 5. 10×陰極緩沖液（上槽緩沖液） [1M Tris; 1M Tricine ;1% SDS; pH 8.25] Tris堿 121.14 g Tricine 179.2 g SDS 10g 用ddH2O溶解， 用HCl調(diào)節(jié)pH至8.25，定容至1000ml。 貯存：4℃ 注：使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用 6. 固定液 5％ 戊二醛溶液 注：此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。 7. 染色液 冰醋酸 100ml 考馬斯亮藍G-250 0.25g 水 900ml 8. 脫色液 冰醋酸 100ml 水 900ml 9. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml） 1ml 1M Tris-Cl pH6.8 2.4ml 甘油 0.8g SDS 0.31g DTT（或者400μl β-巰基乙醇） 2mg 考馬斯亮藍G-250 用滅菌ddH2O定容至10ml 混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?br /> 超低分子量蛋白Marker凝膠的配制方法： （一塊0.75mm mini膠用量） 分離膠 濃縮膠 18％T, 5%C /6.0 ml 5％T, 3.3%C/4 ml 40% PAA（19:1） 2.7 ml / 40% PAA (29:1) / 0.5 ml 凝膠緩沖液 1.5 ml 1 ml 乙二醇（電泳級） 1.8 ml / ddH2O / 2.5 ml 10％APS 45 μl 30 μl TEMED 9 μl 6 μl 超低分子量蛋白Marker 配套試劑 名稱 貨號 規(guī)格 貯存 超低分子量蛋白Marker I（3.3-20.1kD） RTD6101 10次（100μl） -20℃ 超低分子量蛋白Marker II（1.4-26.6kD） RTD6107 10次（100μl） -20℃ 彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker（1.2-45kD） RTD6110 10次 （50μl） -20℃ 40% PAA（19:1） AC1914 100ml 4℃ 40% PAA（29:1） AC2914 100ml 4℃ 凝膠緩沖液 GB010 100ml 4℃ 滅菌水 DE005 100ml 室溫 10% APS AP020 5×1ml -20℃ TEMED TE040 10ml 室溫 10×陽極緩沖液 AB080 100ml 4℃ 10×陰極緩沖液 CB010 100ml 4℃ 2×Tricine 上樣緩沖液 TP050 5×1ml -20℃ 考馬斯亮藍快速染色液 RTD6201 500ml 4℃ 乙二醇 EA0582 25ml 室溫 50%戊二醛 AM155 50ml 4℃ |
7樓2013-01-07 14:34:57
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- BioEPI: 4
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2013-01-07 03:08:26
3樓2013-01-07 07:17:27
shaohuiwu007
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 262.6
- 帖子: 68
- 在線: 53.1小時
- 蟲號: 1019371
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2013-01-07 11:36:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪��？！ 2026-03-31 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程調(diào)劑 +16 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程339求調(diào)劑 +11 | hyz0119 2026-03-31 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +9 | 舟自梗 2026-04-01 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +9 | 《樹》 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +5 | 大饞小子 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績338 +8 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | 想上學(xué)求調(diào) 2026-04-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 358求調(diào)劑 +3 | 王向陽花 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 土木304求調(diào)劑 +3 | 兔突突突， 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑：085600材料與化工，考材科基，總分319 +17 | 678lucky 2026-03-31 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +12 | Koxui 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿：西北大學(xué)，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑 +7 | 12.27 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)調(diào)劑 +11 | 景隨風 2026-03-29 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | GK72 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 青春裁為三截 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +6 | @taotao 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +6 | 小懶蟲不懶了 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|