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ben7737873鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
克隆篩選時(shí) 有關(guān)卡那霉素抗性菌落鑒定的一個(gè)問題
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如題，本人第一次做卡那霉素抗性的克隆篩選實(shí)驗(yàn)，昨天下午5點(diǎn)多開始培養(yǎng)的細(xì)菌，今早發(fā)現(xiàn)卡那平板上長(zhǎng)了10來顆個(gè)體很大的菌落，和我以前做的氨芐板的菌落明顯不同，只有1個(gè)菌落是正常大小的，請(qǐng)問是不是卡那霉素實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)時(shí)間不能這么長(zhǎng)，要比氨芐板時(shí)間短些？或者說我的這些大個(gè)體菌落，都是雜菌？因?yàn)槲衣犝f環(huán)境中帶有卡那的菌比氨芐多很多，是這樣嗎？謝謝 實(shí)驗(yàn)載體是重組的pet28a |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 沒有這個(gè)說法，克隆大小和實(shí)驗(yàn)有關(guān)。即使同時(shí)轉(zhuǎn)化相同的受體，用同樣的抗性篩也有的板克隆大有的小。你說的個(gè)體大是多大？直徑多少？你是否做了負(fù)對(duì)照？如果負(fù)對(duì)照不長(zhǎng)的話應(yīng)該不是雜菌。 |
2樓2013-01-08 13:26:46
ben7737873
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3樓2013-01-08 16:04:07
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4樓2013-01-08 20:19:12
cicelyzh
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5樓2013-01-09 08:03:58
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各位大俠好 我也是第一次用kana做篩選試驗(yàn)，我的質(zhì)粒是lana，宿主菌是DH5.我遇到的問題很怪的：1.加有kana的液體培養(yǎng)基中經(jīng)過搖菌長(zhǎng)出細(xì)菌了，但是在加有kana的固體培養(yǎng)基分區(qū)劃線后卻長(zhǎng)不出細(xì)菌，2.更奇怪的是培養(yǎng)基的底層還有類似氣泡的小東西，剛開始還以為是菌落，最后看好像是培養(yǎng)基凹進(jìn)去。3.我從長(zhǎng)菌的液體培養(yǎng)基中取出一環(huán)分區(qū)劃線，可是線上出現(xiàn)了很多液體，不一會(huì)時(shí)間，又在底層出現(xiàn)氣泡似的東西。 我已經(jīng)重復(fù)做了兩次，培養(yǎng)基也是重新做的。為什么還是不行？ 還有，我用的kana是硫酸卡那霉素，會(huì)有影響嗎？終濃度用的50ug/ml. 各位大哥大姐，幫幫忙了，我快愁死了。謝謝謝謝！ |
6樓2013-05-13 22:38:46
7樓2013-11-22 09:23:39
cicelyzh
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8樓2013-11-22 11:03:13
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