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yingwuzhe25新蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助分子生物學(xué)技術(shù)
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1.如何在“體內(nèi)”設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)確定細(xì)胞某一生理活動(dòng)與兩個(gè)大分子的“直接”相互作用有關(guān)？ 2.如何尋找某一轉(zhuǎn)錄因子在“體內(nèi)”所結(jié)合的啟動(dòng)子位點(diǎn)？ 小弟跨專業(yè)，有些問題還不懂，懇請知道的高手能夠給予解答，謝謝！ |
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gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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yingwuzhe25: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝 2013-01-13 19:53:04
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1.如何在“體內(nèi)”設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)確定細(xì)胞某一生理活動(dòng)與兩個(gè)大分子的“直接”相互作用有關(guān)？ 答：可以用BIFC來驗(yàn)證或者FRET技術(shù)來驗(yàn)證 a 雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation，BiFC)分析技術(shù)，是由Hu等在2002年最先報(bào)道的一種直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用的新技術(shù).該技術(shù)巧妙地將熒光蛋白分子的兩個(gè)互補(bǔ)片段分別與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，如果熒光蛋白活性恢復(fù)則表明兩目標(biāo)蛋白發(fā)生了相互作用.其后發(fā)展出的多色熒光互補(bǔ)技術(shù)(multicolor BiFC)，不僅能同時(shí)檢測到多種蛋白質(zhì)復(fù)合體的形成，還能夠?qū)Σ煌鞍踪|(zhì)間產(chǎn)生相互作用的強(qiáng)弱進(jìn)行比較.目前，該技術(shù)已用于轉(zhuǎn)錄因子，G蛋白βγ亞基的二聚體形式，不同蛋白質(zhì)間產(chǎn)生相互作用強(qiáng)弱的比較以及蛋白質(zhì)泛素化等方面的研究工作上. b. 熒光能量共振轉(zhuǎn)移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)是較早發(fā)展起來的一門技術(shù)，隨著綠色熒光蛋白應(yīng)用技術(shù)的發(fā)展，F(xiàn)RET已經(jīng)成為檢測活體中生物大分子納米級(jí)距離和納米級(jí)距離變化的有力工具，在生物大分子相互作用分析、細(xì)胞生理研究、免疫分析等方面有著廣泛的應(yīng)用。 (以上內(nèi)容a&b來源于網(wǎng)絡(luò)) 2.如何尋找某一轉(zhuǎn)錄因子在“體內(nèi)”所結(jié)合的啟動(dòng)子位點(diǎn)？ 答：可以做Chip on CHIP CHIP是染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay ）的縮寫，這個(gè)東西是目前唯一的研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。 CHIP-on-chip就是先用特異性抗體把目的組蛋白特異地沉淀下來，當(dāng)然也包括上面纏繞的DNA，再把DNA單獨(dú)拿出來去擴(kuò)增，最后再上芯片，就是這么個(gè)過程咯。 另附這個(gè)技術(shù)哦wiki鏈接：http://en.wikipedia.org/wiki/ChIP-on-chip |
2樓2013-01-10 22:32:19
yingwuzhe25
新蟲 (正式寫手)
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3樓2013-01-13 19:54:58
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