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yingwuzhe25新蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助分子生物學(xué)技術(shù)
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1.如何在“體內(nèi)”設(shè)計實驗確定細(xì)胞某一生理活動與兩個大分子的“直接”相互作用有關(guān)？ 2.如何尋找某一轉(zhuǎn)錄因子在“體內(nèi)”所結(jié)合的啟動子位點？ 小弟跨專業(yè)，有些問題還不懂，懇請知道的高手能夠給予解答，謝謝！ |
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yingwuzhe25
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3樓2013-01-13 19:54:58
gyesang
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yingwuzhe25: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝 2013-01-13 19:53:04
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1.如何在“體內(nèi)”設(shè)計實驗確定細(xì)胞某一生理活動與兩個大分子的“直接”相互作用有關(guān)？ 答：可以用BIFC來驗證或者FRET技術(shù)來驗證 a 雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation，BiFC)分析技術(shù)，是由Hu等在2002年最先報道的一種直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用的新技術(shù).該技術(shù)巧妙地將熒光蛋白分子的兩個互補(bǔ)片段分別與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，如果熒光蛋白活性恢復(fù)則表明兩目標(biāo)蛋白發(fā)生了相互作用.其后發(fā)展出的多色熒光互補(bǔ)技術(shù)(multicolor BiFC)，不僅能同時檢測到多種蛋白質(zhì)復(fù)合體的形成，還能夠?qū)Σ煌鞍踪|(zhì)間產(chǎn)生相互作用的強(qiáng)弱進(jìn)行比較.目前，該技術(shù)已用于轉(zhuǎn)錄因子，G蛋白βγ亞基的二聚體形式，不同蛋白質(zhì)間產(chǎn)生相互作用強(qiáng)弱的比較以及蛋白質(zhì)泛素化等方面的研究工作上. b. 熒光能量共振轉(zhuǎn)移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)是較早發(fā)展起來的一門技術(shù)，隨著綠色熒光蛋白應(yīng)用技術(shù)的發(fā)展，F(xiàn)RET已經(jīng)成為檢測活體中生物大分子納米級距離和納米級距離變化的有力工具，在生物大分子相互作用分析、細(xì)胞生理研究、免疫分析等方面有著廣泛的應(yīng)用。 (以上內(nèi)容a&b來源于網(wǎng)絡(luò)) 2.如何尋找某一轉(zhuǎn)錄因子在“體內(nèi)”所結(jié)合的啟動子位點？ 答：可以做Chip on CHIP CHIP是染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay ）的縮寫，這個東西是目前唯一的研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。 CHIP-on-chip就是先用特異性抗體把目的組蛋白特異地沉淀下來，當(dāng)然也包括上面纏繞的DNA，再把DNA單獨拿出來去擴(kuò)增，最后再上芯片，就是這么個過程咯。 另附這個技術(shù)哦wiki鏈接：http://en.wikipedia.org/wiki/ChIP-on-chip |
2樓2013-01-10 22:32:19
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