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Zedone木蟲 (正式寫手)
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[求助]
有關在野生菌基礎構(gòu)建過表達細菌的問題
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小弟手上有一株降解細菌，革蘭氏陰性，基因X是編碼該細菌降解Y物質(zhì)的還原酶的基因。前段時間一直有一個想法，想通過向該菌野生型導入攜帶基因X片段的表達質(zhì)粒，使還原酶在野生型基礎上表達量增加，以構(gòu)建出高降解能力的菌株。(我先前在用該表達質(zhì)�；匮aX基因缺失菌株的時候，不僅恢復了功能，而且比野生型的降解能力稍微搞一些。) 但是按照設想構(gòu)建出來的菌株的降解能力不但沒有提高，反而降低了。自己不知該如何解釋這一奇怪的現(xiàn)象。前請各位大神能否幫忙解釋和推測其原因，感激不盡。 |
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2樓2013-01-12 22:21:23
cicelyzh
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Zedone
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
Zedone: 金幣+10, 嗯，說的很詳細。你所說的解決辦法我做過的，也就是該基因的突變菌株回補實驗。當時的效果是升高量不太明顯，所以才決定這么做的。按照你的說法，我想可以在前面加個強啟動子。3q 2013-01-14 11:00:23
Zedone: 金幣+10, 嗯，說的很詳細。你所說的解決辦法我做過的，也就是該基因的突變菌株回補實驗。當時的效果是升高量不太明顯，所以才決定這么做的。按照你的說法，我想可以在前面加個強啟動子。3q 2013-01-14 11:00:23
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你的這種情況是同源依賴性基因沉默。就是說你把另一個相同的基因拷貝轉(zhuǎn)到宿主里后發(fā)現(xiàn)導入的和原有的拷貝都表達下降，甚至完全不表達。引起這個的原因可能有轉(zhuǎn)錄水平或者轉(zhuǎn)錄后水平的。轉(zhuǎn)錄水平的基因沉默與形成異染色質(zhì)或者DNA甲基化有關。轉(zhuǎn)錄后沉默是mRNA形成后不穩(wěn)定而不能形成正常的翻譯產(chǎn)物。 當然，因為沉默的機理的復制性，過表達時候用野生背景也不一定發(fā)生沉默，有時候也能實現(xiàn)過表達。所以，為了避免沉默，過表達往往建在突變株的背景上。既然你的過表達株系發(fā)生了這個問題，解決你的問題的最簡單的辦法是如果你能把原來的拷貝敲除掉的話，用那個背景做過表達就沒有問題了。 |
6樓2013-01-14 02:50:30
cicelyzh
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8樓2013-01-16 13:47:01
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