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Zedone木蟲 (正式寫手)
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[求助]
有關(guān)在野生菌基礎(chǔ)構(gòu)建過表達(dá)細(xì)菌的問題
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小弟手上有一株降解細(xì)菌，革蘭氏陰性，基因X是編碼該細(xì)菌降解Y物質(zhì)的還原酶的基因。前段時(shí)間一直有一個(gè)想法，想通過向該菌野生型導(dǎo)入攜帶基因X片段的表達(dá)質(zhì)粒，使還原酶在野生型基礎(chǔ)上表達(dá)量增加，以構(gòu)建出高降解能力的菌株。(我先前在用該表達(dá)質(zhì)粒回補(bǔ)X基因缺失菌株的時(shí)候，不僅恢復(fù)了功能，而且比野生型的降解能力稍微搞一些。) 但是按照設(shè)想構(gòu)建出來的菌株的降解能力不但沒有提高，反而降低了。自己不知該如何解釋這一奇怪的現(xiàn)象。前請(qǐng)各位大神能否幫忙解釋和推測(cè)其原因，感激不盡。 |
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2樓2013-01-12 22:21:23
cicelyzh
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3樓2013-01-13 01:50:44
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Zedone: 金幣+5 2013-01-13 22:04:31
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Zedone: 金幣+5 2013-01-13 22:04:31
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同行，同行~ 我也正在做一株陰性降解菌，不過我的目標(biāo)是降解基因，也是導(dǎo)入質(zhì)粒，不過是沒有影響的基因片段 就你的情況，基因的控制是微妙的，相互之間的影響也是不可預(yù)見的，一般構(gòu)建高效菌 都是將高效基因 插入到容易生長的菌體中，這樣構(gòu)建的。 你知道這段基因，是吧，那你不如就把這段基因 導(dǎo)入簡(jiǎn)單的菌體中，比如E coli. 可以達(dá)到你的目的~ 希望對(duì)你有幫助~ |
4樓2013-01-13 15:28:50
Zedone
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5樓2013-01-13 22:04:21
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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Zedone: 金幣+10, 嗯，說的很詳細(xì)。你所說的解決辦法我做過的，也就是該基因的突變菌株回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。當(dāng)時(shí)的效果是升高量不太明顯，所以才決定這么做的。按照你的說法，我想可以在前面加個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子。3q 2013-01-14 11:00:23
Zedone: 金幣+10, 嗯，說的很詳細(xì)。你所說的解決辦法我做過的，也就是該基因的突變菌株回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。當(dāng)時(shí)的效果是升高量不太明顯，所以才決定這么做的。按照你的說法，我想可以在前面加個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子。3q 2013-01-14 11:00:23
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你的這種情況是同源依賴性基因沉默。就是說你把另一個(gè)相同的基因拷貝轉(zhuǎn)到宿主里后發(fā)現(xiàn)導(dǎo)入的和原有的拷貝都表達(dá)下降，甚至完全不表達(dá)。引起這個(gè)的原因可能有轉(zhuǎn)錄水平或者轉(zhuǎn)錄后水平的。轉(zhuǎn)錄水平的基因沉默與形成異染色質(zhì)或者DNA甲基化有關(guān)。轉(zhuǎn)錄后沉默是mRNA形成后不穩(wěn)定而不能形成正常的翻譯產(chǎn)物。 當(dāng)然，因?yàn)槌聊臋C(jī)理的復(fù)制性，過表達(dá)時(shí)候用野生背景也不一定發(fā)生沉默，有時(shí)候也能實(shí)現(xiàn)過表達(dá)。所以，為了避免沉默，過表達(dá)往往建在突變株的背景上。既然你的過表達(dá)株系發(fā)生了這個(gè)問題，解決你的問題的最簡(jiǎn)單的辦法是如果你能把原來的拷貝敲除掉的話，用那個(gè)背景做過表達(dá)就沒有問題了。 |
6樓2013-01-14 02:50:30
cicelyzh
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8樓2013-01-16 13:47:01
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